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千里光抑菌作用探討論文

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千里光抑菌作用探討論文

【摘要】目的比較千里光屬植物水煎劑抑菌效果,為千里光潛在藥用價值的開發利用提供依據。方法二倍稀釋法被用于檢測4種千里光對5種細菌的最低抑菌濃度(MIC)。結果4種千里光對甲型副傷寒桿菌表現出相同的抑菌效果,但對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌和福氏痢疾桿菌抑菌作用不同,表現為全緣千里光對金黃色葡萄球菌抑菌作用最強(MIC=1.95g/L),對大腸埃希菌和甲型副傷寒桿菌抑菌能力最差(MIC=7.81g/L)。結論全緣千里光可能具有更高的抗菌有效藥用成分,同種千里光對不同細菌表現出不同最低抑菌濃度可能是由于不同細菌生物學性狀的差異所致。

【關鍵詞】千里光;抑菌作用;最低抑菌濃度

千里光SenecioscandensBuch-Ham系菊科(compositae)千里光屬多年生草本植物[1],是我國應用歷史悠久的傳統中藥,有清熱解毒、殺蟲、明目、涼血、生肌、驅風除濕的功效[2]。千里光在我國南方分布多個種,包括掌裂千里光、麻葉千里光、全緣千里光、羽葉千里光等[3,4]。有研究表明,千里光的藥理學作用集中體現在抗菌[5]、抗鉤端螺旋體[6]、抗滴蟲并具有抗氧化及自由基清除活性[7]等作用;臨床試驗表明,千里光對炎癥性疾患及細菌性感染具有一定療效[8],但迄今尚無針對不同種千里光的抗菌效果進行研究的報道。本研究組根據資源產地和形態學特征收集整理不同種千里光,以此為基礎,比較不同種千里光抗菌效果,以分析千里光的遺傳資源與藥理學性狀之間的關系,為進一步明確千里光的藥理作用成分和種質改良提供參考依據。

1材料

1.1參試千里光資源參試的8份千里光資源系本研究組采自貴州省遵義、畢節、貴陽和安順4個地區的野生種,包括掌裂千里光、麻葉千里光、全緣千里光和羽葉千里光各2份(表1)。表1參試千里光SenecioscandensBuch.-Ham.的產地與表型(略)

1.2供試菌種5種供試菌種系遵義醫學院微生物學教研室保存菌種,均為標準株,包括金黃色葡萄球菌(S.aureus)No.CMCC26001,銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)No.ATCC27853,大腸埃希菌(E.coli)No.ATCC25922,甲型副傷寒桿菌(S.ParatyphiA)No.CMCC50001,福氏痢疾桿菌(S.flexneri)No.CMCC51573。

1.3培養基M-H液體培養基。

2方法

2.1抗菌原液(千里光煎劑)的制備剪取千里光第7片葉以上的部位,于30℃烘干至恒重。參照陳奇[9]的方法,稱取10g千里光置于砂鍋,加20ml蒸餾水浸泡30min后,用慢火煎至水量濃縮為10ml過濾,藥渣另加20ml蒸餾水繼續煎煮、過濾,將2次濾液共20ml煎煮濃縮,定容至10ml,即得濃度為1g/ml的千里光水煎劑,經高壓蒸氣滅菌后備用。

2.2中藥最低抑菌濃度(MIC)的測定按NCCLS推薦的瓊脂稀釋法測定實驗菌株的MIC值。制備千里光瓊脂平板,千里光和藥敏培養基瓊脂按比例混合,使千里光的終濃度分別為250.0,125.0,62.5,31.25,15.62,7.81,3.90,1.95,0.98g/L。

2.3菌液的制備菌液調整為0.5麥氏單位后再按照1:10進行稀釋,用1μl定量接種環點種于瓊脂表面,最終瓊脂上所含接種菌量為104個/ml。采用多點接種法,首先點種對照平板(不含千里光水煎劑),隨后從最低濃度開始,依次點種不同濃度的千里光平板,于37℃孵育,24h后記錄無菌生長的最低千里光濃度。

3結果

3.1千里光抗菌效果比較本研究結果顯示,當終濃度高于15.62g/L時,4種千里光資源對參試的5種細菌生長均表現出抑制作用(圖1-a)。盡管各種千里光都表現出抗菌作用,但量化抗菌效果的最低抑菌濃度存在差異。當全緣千里光水煎液終濃度為7.81g/L時,僅大腸埃希菌出現菌斑(圖1-b);而當其終濃度為3.90g/L時,大腸埃希菌和甲型副傷寒桿菌能夠生長(圖1-c);在其終濃度為1.95g/L時,表現為金黃色葡萄球菌不能生長,其余4種細菌能正常生長(圖1-d)。對掌裂千里光而言,當其終濃度為3.90g/L時,銅綠假單胞菌、大腸埃希菌和甲型副傷寒桿菌能夠正常生長(圖1-e)。當麻葉千里光的水煎液終濃度為7.81g/L時,表現為銅綠假單胞菌和大腸埃希菌出現菌斑,而其它三種參試細菌不能正常生長(圖1-f);而對終濃度同為7.81g/L的羽葉千里光,表現為對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、甲型副傷寒桿菌和福氏痢疾桿菌有抗菌作用(圖1-g)。4種千里光的終濃度為0.98g/L時表現為對參試的5種細菌沒有抗性(圖1-h)。

3.2不同種千里光的最低抑菌濃度如表2所示,參試的4種千里光對不同細菌抗菌作用有不同的最低抑菌濃度,表現出不同的抗菌效果。與全緣千里光對金黃色葡萄球菌抗菌效果相比較,掌裂千里光、羽葉千里光和麻葉千里光的最低抑菌濃度同為3.90g/L,高出全緣千里光的MIC一倍。4種千里光對銅綠假單胞菌的抗菌作用表現出更大的差異,其中,麻葉千里光的抗菌效果最差,最低抑菌濃度為15.62g/L,然后是掌裂千里光和羽葉千里光,二者的MIC同為7.81g/L,全緣千里光的MIC最低,為3.90g/L,表現出最好的抗菌效果。整體來講,4種千里光對參試的大腸埃希菌抗菌作用較低,其MIC介于7.81~15.62g/L之間,其中,掌裂千里光、羽葉千里光和麻葉千里光對大腸埃希菌的抗菌能力顯得更低,抗菌效果最好屬全緣千里光,其MIC也高達7.81g/L。不同種千里光對甲型副傷寒桿菌的抗菌作用沒有表現出差異,參試的8份千里光資源的MIC均為7.81g/L,顯示出相對較低的抗菌能力。4種千里光對福氏痢疾桿菌的抗菌作用表現為掌裂千里光和全緣千里光較強,二者的MIC為3.90g/L,相對來講,羽葉千里光和麻葉千里光的抗福氏痢疾桿菌效果較差,它們的MIC因此顯得更高(7.81g/L)。

總體看來,4種千里光對不同細菌的抗菌效果并不相同,而且同種千里光對不同細菌的最低抑菌濃度也不相同。其中,千里光對金黃色葡萄球菌的抗菌效果最好,而對大腸埃希菌的抗菌作用最差。4種千里光對5種細菌的抗菌效果顯示,全緣千里光對5種細菌的抗菌作用更強(見表2)。表2參試千里光對5種細菌的最低抑菌濃度(略)

4討論

千里光被認為是一種有良好開發前景的抗菌中草藥[10]。體外抗菌實驗結果表明,千里光全草水煎劑具有廣譜性抗菌作用[11],但迄今尚無對不同種千里光藥理學作用進行比較的研究,使千里光開發缺乏量化分析指標。我們通過對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、甲型副傷寒桿菌和福氏痢疾桿菌抗菌效果研究證實了千里光的細菌生長抑制作用,本研究結果表明,不同種千里光對甲型副傷寒桿菌有相同的抑菌效果,但對其它4種不同細菌的抗菌作用存在差異,表現為全緣千里光的抗菌效果更佳,意味著全緣千里光具有更高的潛在藥用價值。

周艷娟等[12]比較羽葉千里光根、莖、葉和花4個部位甲醇提取物的抗氧化活性時發現葉提取物對二苯苦味酰自由基(DPPH)清除作用最強,表明植物不同器官的生理代謝存在差異,這種差異會影響次生代謝產物的累積。千里光遺傳特性穩定[2],不同種千里光遺傳背景差異穩定,這可能是導致不同種千里光對不同菌株抑菌效果差異的遺傳學因素。

生藥中藥理作用顯著或足以說明該生藥療效的成分,通常認為是有效成分[13]。目前發現,千里光水煎劑含有黃酮及其苷類、酚酸性成分、鞣質、生物堿以及揮發油等化學成分[14],盡管發現千里光全草水煎劑及黃酮類提取物均有很強的抗菌作用,但決定千里光藥理學性狀的有效化學成分究竟是哪些,卻并不清楚。本研究發現,除甲型副傷寒桿菌外,不同種千里光對同一種細菌的最低抑菌濃度并不相同,表明不同種千里光的有效抑菌化學成分的含量或天然產物結構之間存在差異。能否結合不同的抗菌效果,對比分析不同種千里光水煎劑的化學組分,以明確千里光的有效抗菌化學成分或結構,正在做進一步研究。超級秘書網:

【參考文獻】

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[4]張文平,張文書,曾雪英.千里光與甲氧芐氨嘧啶聯用抗菌作用實驗研究[J].時珍國醫國藥,2006,17(6):944.

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[9]陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛生出版社,1993:261.

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[14]李華,聶芳紅,陳進東,等.千里光抗菌有效部位化學成分及其急性毒性研究[J].中獸醫醫藥雜志,2008,1:7

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