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淺析大麥性狀多樣性

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淺析大麥性狀多樣性

本研究利用SSR分子標記技術分析不同來源的大麥親本遺傳多樣性,比較背景差異,同時鑒定其農藝性狀,以期為大麥育種提供參考。

材料與方法

材料試驗材料為甘肅農業(yè)大學甘肅省作物遺傳改良與種質創(chuàng)新重點實驗室/甘肅省干旱生境作物學重點實驗室麥類種質創(chuàng)新課題組提供的44個大麥親本材料(名稱詳見表2),種植于甘肅省武威黃羊鎮(zhèn)育種試驗站。農藝性狀鑒定在成熟期對試驗材料的株高、穗長、芒長等農藝性狀進行抽樣調查,取平均值。SSR分析總基因組DNA提取采用CTAB法,參考Andrew[11]、Frederick等[12],略有改動。本實驗選用的32個標記(表1)源自Korff等[13],所有引物均由北京賽百盛生物工程有限公司合成。PCR反應參照Korff等[13],并稍加改動。PCR反應體系(10μL)為:1.5μL10×Buffer(含20mmol•L-1Tris-HCl(pH8.4),200mmol•L-1KCl,100mmol•L-1(NH4)2SO4,15mmol•L-1MgCl2)、0.2μLTaq酶(2.5U•μL-1)、1.0μLdNTPMixture(2.5mmol•L-1each)、4.8μLddH2O、上下游引物各0.5μL、1.5μL模板DNA(60ng•μL-1)。擴增程序為:94℃預變性3min;94℃變性50s,64~55℃(tou-ch-downPCR)退火50s,72℃下延伸50s,10個循環(huán);94℃變性50s,55℃退火50s,72℃下延伸50s,30個循環(huán);72℃延伸10min。擴增產物用8.0%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離,銀染顯色后置于白熾燈箱上照相、記錄。1.4數據庫,數據保存到Excel中。按Nei和Li[14]的方法計算品種間相似系數(GS):GS=2Nij/(Ni+Nj)其中Ni為i品種出現(xiàn)的譜帶數,Nj為j品種出現(xiàn)的譜帶數,Nij為i品種和j品種共有的譜帶數。利用GS值按非加權配對法(UPGMA)和SHAN程序聚類分析,并通過Tree-Plot模塊生成聚類圖[15],統(tǒng)計分析在NTSYS-pc系統(tǒng)中進行。

結果與分析

參試材料的農藝性狀從表2可知,44份親本材料中,株高最高的是蘇鹽3號,最矮的是E14,可以將其用作株高QTL定位的親本,同時E14可以考慮作為抗倒親本材料。阿恩特13的穗長最長,但是穗粒數最多的是SCARLETT,說明阿恩特13的小穗著生稀疏,SCARLETT的穗型較理想。44份材料中E14、JO4970、Z193V020W、21399-2316、MER-LT、Z202V078W、Z200V001W、蘇鹽0014、E122V021W、E211V035W、Z122V029W等11份材料存在不同程度的倒伏現(xiàn)象,在用作組合親本時需慎重考慮。晚熟材料有6份,分別為Z216V023W、MERLT、Z145V066W、E13、阿恩特13、恩斯293。2.2SSR標記的多態(tài)性SSR分析結果表明,在32個SSR位點上,23個具有多態(tài)性,達到71.9%。共檢測到127個等位變異,每個標記能檢測到1~6個,平均可檢測到3.9個等位變異。HVM54標記的多態(tài)性位點多達6個,HVLTPPB標記檢測到的多態(tài)性位點數是4個,S53707只檢測到1個多態(tài)性位點。MGB325、Bmac32和HVTUB等9個標記未發(fā)現(xiàn)多態(tài)性位點。說明這些標記可以用于本研究的44份親本材料的遺傳多樣性分析,比較其遺傳背景間的差異。2.3大麥親本間的遺傳相似系數(GS)根據SSR標記數據計算品種間的SSR遺傳相似系數(GS),其變異范圍為0.457~0.984,平均值為0.720。其中,E-15與Z1B3V002W間的遺傳GS最低,為0.457,而E211V035W與Z145V030W間的遺傳相似系數最高,為0.984。表明這44份大麥親本材料中具有較豐富的遺傳多樣性,有利于大麥育種。2.4大麥品種間的遺傳關系按UPGMA法進行聚類分析(圖1)表明,利用SSR標記能將44份大麥親本相互區(qū)分。在GS值0.610水平上聚為2個大類,其中E-15和Z216V005W兩親本與其他品種間遺傳差異較大,單獨聚為一類,而E14等42個品種則聚為另一類。在第二個大類中又可分為兩個亞類,其中第一亞類包括E-17等27個大麥親本,第二亞類包括Z216V023W等15個大麥親本。以上結果表明,SSR標記不僅能有效地進行品種鑒定,而且還能較好地揭示品種間的親緣關系。

討論有關大麥SSR分子標記的研究已經有一些報道。楊振華等[16]利用SSR標記對10個甘啤系列啤酒大麥品種(系)和25個國外引進品種的遺傳背景進行了遺傳多樣性分析,結果表明,大多數甘啤系列品種(系)分在同一類中,其遺傳距離較近,遺傳基礎較狹窄;國外引進品種的分布范圍相對較寬,其遺傳基礎較廣泛。本研究對44份大麥親本進行了SSR標記研究,并鑒定其農藝性狀,結果表明,品種間遺傳相似系數(GS)變幅為0.457~0.984,平均值為0.720。這44份材料部分是由國外引進,部分是從國內不同地區(qū)搜集的,因此多樣性水平較高。張赤紅和張京[17]利用49對SSR引物對中國240份和國外60份大麥品種資源進行了遺傳多樣性研究,結果表明,大麥7條染色體中第五和第六條染色體遺傳多樣性較高,第三、四、七條染色體遺傳多樣性比較低。本研究選用的SSR標記分布于大麥1H~7H染色體,能夠較全面的分析這44分材料的遺傳多樣性,比較遺傳背景的差異,為親本的組合配置在分子水平上提供依據。張大樂等[18]利用SSR標記技術分析了我國啤酒大麥品種的遺傳多樣性,發(fā)現(xiàn)啤酒大麥品種遺傳變異較小,遺傳基礎比較狹窄。朱彩梅等[19]應用SSR標記分析了中國糯大麥種質的遺傳多樣性,表明中國糯大麥具有豐富的遺傳多樣性。

綜合來看,我國啤酒大麥材料的遺傳多樣性水平較低,遺傳基礎過于狹窄,需要多引進國外材料,同時加大野生資源的利用,豐富我國啤酒大麥遺傳基礎,推動該作物的育種工作。Z145V030W與E211V035W聚為一類,遺傳相似系數最高為0.984,從農藝性狀上看株高、穗長、芒長等差異較不明顯,而第二節(jié)間長度存在差異Z145V030W為5.27cm,E211V035為10.08cm,由此可以看出表型性狀和聚類分析結果較一致,由于品種差異,第二間長度存在差異屬正常。E-15與Z1B3V002W在44個大麥親本中的遺傳相似系數最低為0.457,它們之間除株高差異不明顯外其余農藝性狀都有不同程度的差異,這也與聚類分析結果較一致。本研究結果可為培育新品種和品種鑒定,以及評價親本材料的遺傳多樣性提供一定參考,同時結合大麥農藝性狀為雜交育種工作者提供遺傳差異較大、親緣關系較遠的優(yōu)質親本材料。

作者:王鵬喜、賴勇、孟亞雄、李葆春、馬小樂、王化俊單位:甘肅省作物遺傳改良與種質創(chuàng)新重點實驗室、甘肅省干旱生境作物學重點實驗室

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