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【摘要】目的建立地喹氯銨含片的含量測(cè)定及含量均勻度的方法。方法采用HPLC法，以0.005mo1/L庚烷磺酸鈉溶液甲醇乙腈三乙胺（體積比200∶75︰225︰2.5）（用磷酸調(diào)至pH值3.5）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm；流速：1.0mL·min-1。結(jié)果地喹氯銨在5～22.5μg·mL-1線性關(guān)系良好，r=0.999（n=7），平均回收率為100.4％、RSD＝1.38％。用本法對(duì)試制品與市售品的含量均勻度、含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果說明本公司的研制品達(dá)到上市品的要求。結(jié)論本文為地喹氯銨含片的產(chǎn)品評(píng)價(jià)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供了一定的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

【關(guān)鍵詞】地喹氯銨含片；地喹氯銨；HPLC

地喹氯銨口含片是一個(gè)對(duì)口腔咽喉頭細(xì)菌感染有良好療效的制劑，是非抗生素類藥，有對(duì)革蘭氏陰、陽性菌等病原菌作用明顯的廣泛的抗菌譜，并對(duì)抗酸桿菌及真菌均有較強(qiáng)的殺滅作用，對(duì)組織無刺激性［1～4］。該藥品的原料和制劑在國內(nèi)外均有研究和批準(zhǔn)上市，原料藥在我國的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)及日本藥局方外醫(yī)藥品成分規(guī)格書以及英國藥典記述的含量測(cè)定方法都采用非水滴定法；其制劑含量測(cè)定采用HPLC測(cè)定法，但色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)內(nèi)容不同。采用現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)及條件［5－6］對(duì)地喹氯銨片劑進(jìn)行含量測(cè)定及含量均勻度的檢測(cè)，結(jié)果地喹氯銨主峰和雜質(zhì)峰無法達(dá)到有效分離。為進(jìn)一步控制其質(zhì)量，本文參考日本制劑中的檢驗(yàn)方法，優(yōu)化其色譜條件，使地喹氯銨主峰和相鄰雜質(zhì)峰達(dá)到有效分離。用優(yōu)化后確立的含量測(cè)定方法對(duì)本公司的研制品與市售品地喹氯銨含片進(jìn)行質(zhì)量對(duì)比研究，結(jié)果顯示本公司的研制品達(dá)到上市品的要求。

1儀器與試藥

儀器：WATERS600E高效液相色譜儀（美國WATERS公司）；UV2201紫外-可見光分光光度計(jì)；（日本島津）；METTLERAE240電子天平（瑞士METTLER）；PHS3C精密酸度計(jì)（上海雷磁儀器廠）；試劑：乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；地喹氯銨對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所暫時(shí)未有供應(yīng)，由日本明治制果提供，含量測(cè)定用，純度為100%，批號(hào)：DCWS-65-1）；地喹氯銨含片（規(guī)格：0.25mg/片）及缺地喹氯銨的空白輔料對(duì)照樣品（汕頭經(jīng)濟(jì)特區(qū)明治醫(yī)藥有限公司）。

2色譜條件

色譜柱DIKMADiamonsilC18（250m×4.6mm,5μm）；流動(dòng)相：0.005mol/L庚烷磺酸鈉溶液甲醇乙腈三乙胺（體積比200∶75∶225∶2.5）（用磷酸調(diào)至pH值3.5）；檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm；流速：1.0mL·min-1，進(jìn)樣量：20μL。在上述色譜條件下，理論塔板數(shù)大于3000，分離度大于5，主峰的保留時(shí)間在7~8min。見圖1。

圖1地喹氯銨含片HPLC圖譜（略）

Fig.1HPLCchromatogramofdequaliniumchloride

3含量測(cè)定

3.1溶液制備

3.1.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取在105℃干燥至恒重的地喹氯銨對(duì)照品適量，加甲醇水磷酸（體積比15∶5∶1）混合液（下簡(jiǎn)稱稀釋劑）溶解并定量稀釋制成每1ml中含10μg的溶液。

3.1.2供試品溶液的制備取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于地喹氯銨0.25mg），置25mL量瓶中，加稀釋劑適量，經(jīng)超聲處理3min，放冷，并稀釋至刻度，搖勻，濾過。

3.2測(cè)定方法精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

3.3專屬性取上述對(duì)照品溶液及按制劑處方配制的缺地喹氯銨的空白輔料對(duì)照樣品溶液，按照測(cè)定方法，分別進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖。結(jié)果空白輔料對(duì)樣品的測(cè)定無干擾，見圖2。

圖2空白輔料HPLC圖譜（略）

Fig2HPLCchromatogramofexcipients

3.4線性關(guān)系考察精密稱取在105℃干燥至恒重的地喹氯銨對(duì)照品12.5mg，置50mL量瓶中,用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備液。精密吸取該貯備液05、0.75、1、1.5、1.75、2、2.5mL分別置25mL量瓶中,用稀釋劑稀釋至刻度，制成一系列濃度的對(duì)照品溶液,按“3.2”項(xiàng)下的方法測(cè)定,記錄色譜圖，以對(duì)照品進(jìn)樣量（ρ）對(duì)其相應(yīng)的峰面積積分值（A）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果地喹氯銨在5～22.5μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，線性回歸方程：A=29939843＋81974.28,r=0.9995。

3.5回收率試驗(yàn)分別精密稱取空白輔料及在105℃干燥至恒重的地喹氯銨對(duì)照品,配制成80%、100%、120%3個(gè)濃度梯度，按“3.2”項(xiàng)下方法分別進(jìn)樣測(cè)定含量并計(jì)算回收率，每個(gè)濃度梯度分別進(jìn)行3次平行試驗(yàn)。結(jié)果見表1。

3.6精密度試驗(yàn)精密量取對(duì)照品溶液，依照“3.2”項(xiàng)下方法測(cè)定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積平均值及RSD值，結(jié)果平均峰面積為1304846.3，RSD=024%。

3.7重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品6份，依照“3.2”項(xiàng)下的方法分別測(cè)定，計(jì)算6次測(cè)定結(jié)果的平均值和RSD值，結(jié)果平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為94.8%，RSD=0.97%。

3.8穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份樣品溶液，置室溫下，分別于0、0.5、1、2、4、6、8h按照“3.2”項(xiàng)下方法測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為0.19%，表明樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

表1回收率試驗(yàn)（略）

Tab.1Resultsofrecoverytest

3.9樣品測(cè)定結(jié)果精密量取9個(gè)批號(hào)本品適量，分別照“3.2”項(xiàng)下的方法測(cè)定，9批樣品測(cè)定結(jié)果見表2。

表2含量測(cè)定結(jié)果（略）

Tab.2Contentsofdequaliniumchloridebuccaltablets

4含量均勻度

取本品1片，置乳缽中，研細(xì)，用甲醇水磷酸（體積比15∶5∶1）混合溶液20mL分次研磨并移至25mL量瓶中，經(jīng)超聲處理3min，放冷，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，制成供試品溶液。按“3.1.1”項(xiàng)的方法制備對(duì)照品溶液,按“3.1.3”項(xiàng)的方法測(cè)定，計(jì)算出每片含地喹氯銨的量。結(jié)果見表3。

5研制品與市售品比較

以本文方法對(duì)本公司研制的地喹氯銨含片與市售品分別進(jìn)行含量均勻度、含量測(cè)定，結(jié)果本公司研制品與上市品的含量及含量均勻度均符合規(guī)定，說明本公司的研制品達(dá)到上市品的要求，見表4。

表3含量均勻度測(cè)定結(jié)果（略）

Tab.3Resultsofweightvariationofdequaliniumchloridebuccaltablets

表4研制品與市售品的測(cè)定結(jié)果（略）

Tab.4Resultsofdeterminationofdifferentsamples

6討論

6．1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取供試品溶液適量，加稀釋劑溶解并稀釋，在200～400nm之間進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果在240nm處有較高的響應(yīng)值，文獻(xiàn)［5］的檢測(cè)波長(zhǎng)也是240nm，故選擇240nm為本法的檢測(cè)波長(zhǎng)。

6．2流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)中采用國家藥品標(biāo)準(zhǔn)［5］的流動(dòng)相組分：0005mol/L庚烷磺酸鈉溶液甲醇乙腈三乙胺（20∶60∶20∶0.5），主峰與雜質(zhì)峰卻無法得到分離；采用日本資料中地喹氯銨含片含量測(cè)定所采用的流動(dòng)相組分：正己烷磺酸鈉溶液甲醇三乙胺（體積比52∶48∶0.5），主峰與雜質(zhì)蜂能得到較好分離，但主峰的出峰時(shí)間在20min以上，實(shí)驗(yàn)過程中需保持柱溫50℃,并且是采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定；為縮短地喹氯銨主峰完全被洗脫的時(shí)間，考慮在流動(dòng)相中增加有機(jī)相乙腈，同時(shí)為與國家藥品標(biāo)準(zhǔn)保持一致，把日本資料中的正己烷磺酸鈉溶液改為庚烷磺酸鈉溶液，并對(duì)各組分的比例進(jìn)行調(diào)整后，得出流動(dòng)相最佳組分及比例關(guān)系為0.005mol/L庚烷磺酸鈉溶液甲醇乙腈三乙胺（體積比200∶75∶225∶2.5），實(shí)驗(yàn)證明，采用此流動(dòng)相及流速1mL/min，主峰的保留時(shí)間只需7～8min，并可保持柱效、峰形均較好（見圖1），實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)柱溫?zé)o特別要求，在常溫（10～30℃）下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性均好。

6．3流動(dòng)相pH值的選擇考慮到普通的十八烷基鍵合硅膠色譜柱在pH＞2.0時(shí)使用較合適，對(duì)該流動(dòng)相pH值從pH3.0～pH8.0進(jìn)行考察，結(jié)果表明流動(dòng)相pH值越低，地喹氯銨的峰形越好，pH值在3.5時(shí)，能得到的較好峰形及最佳的柱效，該pH值與文獻(xiàn)［5］一致。

6．4耐用性的考察分別使用國內(nèi)外不同品牌十八烷基鍵合硅膠色譜柱，使用該色譜條件對(duì)同一批樣品進(jìn)行測(cè)定，其結(jié)果基本一致，表明方法的耐用性較好。

6．5方法的優(yōu)點(diǎn)本文的方法學(xué)研究結(jié)果表明，本法結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性與耐用性好，主峰與雜質(zhì)蜂能得到有效分離，且主峰的保留時(shí)間只需7～8min。可作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量及含量均勻度測(cè)定的方法。

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