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【摘要】目的探討測定胰島素（IRI）的可靠方法。方法采空腹血不抗凝，離心分離成血清，直接上機測定。結果線性范圍在0～335.0mIU/L；靈敏度：0mIU/L的IRI，其平均光量子數為3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子數為30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子數為357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子數為684567。特異性：測定質控血清時，測定值在靶值的95%～105%范圍內。精密度：N=60CV≤5%。結論化學發光免疫法測定胰島素（IRI），靈敏度高，特異性好，精密度高，是一種可靠而穩定的檢測方法。

【關鍵詞】胰島素（IRI）；光量子數；前胰島素原；胰島素原；化學發光免疫法

【Abstract】ObjectiveToexploreareliablemethodforthedeterminationofinsulin.MethodsGatherfastingagglutinatingblood,centrifugalizethemrespectivelytogettheserum,whichweredirectlysetoninstrumenttodetermine.ResultsLinearrang:0～335.0mIU/L，senitivity:themeanquantumof0mIU/LIRI,10.1mIU/LIRI,152.0mIU/LIRIand335.0mIU/LIRIwere3808,30350,357399and684567.Specificity:whenthecontrolserumwasdetermined,themeasurevlaluewaswithinthestandarddeviation（SD）,95%-105%.Precision:N=60CV≤5%.ConclusionChemiluminescenceisareliable,stablemeasurementmethodfordeterminationofinsulinwithhighsensitivity,precisionandspecificity.

【Keywords】insulin;quantum;preproinsulin;proinsulin;chemiluminescence

胰島素（IRI）是一種蛋白質激素，這是由胰島中的β細胞所合成、儲存和分泌的。IRI的功能是調節血液中葡萄糖的濃度水平。IRI初期是在β細胞中，以一種大分子量（分子量為1200）前胰島素原的形式存在。前胰島素原是一條由110氨基酸組成的單鏈前體。前胰島素原被切除掉24個氨基酸序列后形成胰島素原（分子量為9000），胰島素原是胰島素和C-肽的前體［1］。IRI是由兩條氨基酸鏈組成的。最初，IRIA鏈是由21個氨基酸組成，B鏈是由30個氨基酸組成；而C-肽是由31個氨基酸組成。IRI是隨餐后血液中葡萄糖的濃度高低而產生應答的。

IRI水平雖然不是糖尿病患者常規診斷方法，但是IRI水平的檢測對于空腹低血糖患者、普通人群中的胰島素耐受患者、β細胞分泌功能異常患者的意義非常大［2，3］。

1材料與方法

1.1原理IRI的測定是一種直接化學發光技術和雙抗體兩點夾心免疫分析法相結合的測定方法。第一種抗體稱為標識抗體，是由單克隆抗胰島素抗體標記吖啶酯形成的；第二種抗體稱為固相化抗體，是由單克隆抗胰島素抗體以共價鍵的方式與順磁性顆粒相結合形成的。血清中的胰島素與相應抗體發生免疫反應后產生光量子，其光量子數的多少與血清中胰島素的濃度成正比，經標準曲線計算即可求得血清IRI的濃度水平。

1.2儀器與試劑儀器：BAERACS-180型全自動化學發光免疫分析儀。試劑（雙試劑）及標準液由廣州寶迪有限公司提供。

1.3方法取血清于樣品杯中，置全自動化學發光免疫分析儀上，調整好檢測參數：血清25μl+第一試劑50μl于37℃孵育5min，加第二試劑250μl于37℃孵育2.5min，用蒸餾水對反應杯進行分離、抽吸、清洗，最后分別加300μl酸試劑和堿試劑到反應系統中進行反應發光，讀取光量子數，再根據標準曲線，計算出結果。

1.4標準曲線制備采用兩點定標法，將標準血清0.0mIU/L和138.0mIU/L安放于儀器的定標位置上，編入測定程序，上機測定自動打印出標準曲線。

2結果

2.1精密度取混合血清分成兩份，一份當天測定60次，結果IRI的值為22±0.8mIU/L，其對應的CV值為1.8%；另一份做批間試驗，測定10次，測定統計值為21±1.2mIU/L，其對應的CV值為2.8%。

2.2靈敏度0mIU/L的IRI，其平均光量子數為3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子數為30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子數為357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子數為684567。IRI測定的范圍為0～335.0mIU/L。

2.3回收試驗在IRI為25mIU/L的血清中分別加入濃度為1mg/L的胰島素原、濃度為500μg/L的C-肽、濃度為1mg/L的胃泌素、濃度為1mg/L的胰高血糖素、濃度為1mg/L的胰泌素進行回收試驗,分別測得其回收率為:100.8%，95.1%，96.6%，100.2%，101.6%。

2.4線性分析對一份定值血清稀釋不同濃度，觀察測定體系光量子數的變化量，即為IRI與光量子數的關系。結果顯示：IRI在本法的測定范圍是0～335.0mIU/L。當IRI大于335.0mIU/L時，開始偏離線性。因此對濃度高的標本必須先進行適當的稀釋，然后測定。

2.5干擾試驗當溶血（Hb>5g/L）、黃疸（膽紅素>0.2g/L）時,對結果干擾甚微。

2.6正常參考值取100份經我院體檢合格者的血清，其中男50份，女50份，年齡19～55歲，平均37歲。檢測結果IRI：20.5±17.5mIU/L。男女之間差異無顯著性（P>0.05）。

3討論

目前定量測定IRI的方法不多，過去一般用放射免疫法，該法測定步驟繁瑣，為半自動化操作，測定時間長達3天，測定范圍窄，且使用試劑具有放射性，對操作人員造成身體傷害及對周圍環境形成污染。現在基本已被化學發光免疫法所代替，該法測定步驟簡單，為全自動化操作，測定時間短，全過程最短為半小時即可完成，而它使用的試劑安全無放射性，為一般化學試劑，對操作人員無傷害，對周圍環境污染甚微。不過它也有缺點：其試劑為抗體試劑，有效期短，容易失效，定標周期短，一般為2周。在試劑的有效期內和定標周期內，對血清標本進行測定，其結果非常準確可靠。綜上所述，化學發光免疫法測定胰島素（IRI）是目前首選的方法。

【參考文獻】

1康格非,巫向前.臨床生物化學和生物化學檢驗，第2版.北京:人民衛生出版社,2001，256.

2ChevenneD,TrivinF,PorquetD.Insulinassaysandreferencevalues.DiabetesMetab，1999，25（6）：459-476.

3McAuleyKA,WilliamsSM,MannJI,etal.Diagnosinginsulinresistanceinthegeneralpopulation.DiabetesCare,2001,24（3）:460-464.