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關鍵詞：

急性白血病是我國常見的造血系統惡性疾病。其病因及發病機理還不完全清楚，病毒、遺傳因素及染色體異常與它的發生都有關系。現已證實，MTS1/P16基因在人類多種惡性腫瘤中存在著不同形式的改變［1,2］，但有關MTS1/P16基因在急性白血病中的國內報道少［3］。我們采用差別PCR技術對MTS1/P16基因在急性白血病中純合缺失進行檢測，以了解MTS1/P16基因缺失與急性白血病的關系。

1材料與

1.1標本來源30例急性淋巴細胞白血病(ALL)，男19例，女11例，年齡2～70歲，中位年齡19歲。43例急性非淋巴細胞性白血病(ANLL)，男24例，女19例，年齡2.5～73歲，中位年齡34歲。對照組15例，為非惡性血液病病人(缺鐵性貧血7例，血小板減少性紫癜8例)，均為我院住院病人，診斷標準均符合FAB法，前抽骨髓1～2ml，以用于DNA提取。

1.2DNA提取參照《分子克隆實驗指南》［4］提取高分子量DNA，用TE(pH8.0)溶解，紫外分光光度測其OD值，調整濃度至50ng/ml，以備PCR擴增。

1.3引物設計根據已知MTS1/P16基因序列，在第2外顯子的兩側設計1對擴增引物，PCR擴增物為480bp，引物序列如下：PS1:5′-GGAAATTGGAAACTGGAAGC-3′;PS2:5′-TCTGACCTTTGGAAGCTCT-3′。選用DMDExon51引物做內對照，其PCR擴增產物為388bp，引物序列如下：PS1:5′-GAAATTGGCTCTTTAGCTTGTGTTTC-3′；PS2:5′-GGAGAGTAAAGTGATTGGTGGAAAATC-3′。上述引物均由院上海生化所合成。

1.4PCR擴增PCR反應混合液含10×PCRBuffer,200μmol/LdNTP，1μmol/Lprimer,200ng模板DNA，TaqDNA2.5U加H2O至終體積50μl，在DNA擴增儀上進行如下循環：95℃預變性5.0min，95℃，1.0min；58℃，1.0min；72℃，1.5min；30個循環。取5μlPCR產物在2%瓊脂糖凝膠(加EB0.5μg/ml)上電泳(TaqDNA聚合酶為美國LifeTechnologies產品)。

2結果

30例ALL有10例MTS1/P16Exon2純合缺失，頻率為33.3%(10/30)；43例ANLL中有6例MTS1/P16Exon2純合缺失，頻率為14.0%(6/43)，15例對照無MTS1/P16Exon2純合缺失。

3討論

MTS1/P16是定位于人類染色體9P21的多腫瘤抑制基因［2,3］，編碼一分子量為16kD的核磷酸蛋白，P16蛋白可直接作用于細胞周期蛋白依賴激酶(CDK)4/6，周期素(cyclin)D和RB基因編碼蛋白PRb的反饋通路，通過調節PRb活性，抑制細胞從G1→S期轉變，防止細胞增殖［5,6］。MTS1/P16基因在人類多種原發性腫瘤和細胞系中主要表現為純合缺失或突變失活。等位基因純合缺失在白血病細胞系中達25%～65%［1,7］。本實驗發現，30例ALLMTS1/P16純合缺失率為33.3%(10/30)，43例ANLLMTS1/P16純合缺失率為14.0%(6/43)。報道造血系統惡性腫瘤中MTS1/P16基因缺失和突變的檢出率為5.56%～43.60%，平均13.81%，其中以急性淋巴細胞白血病(ALL)檢出率最高，平均為29.80%，而在急性非淋巴細胞白血病(ANLL)，慢性粒細胞白血病(CML)和淋巴瘤患者檢出率極低［8］。Hebert報道55例ALL中22例有MTS1/P16基因缺失，占44%［9］。Ogawa報道1組134例AML，僅有2例有MTS1/P16基因缺失［10］。

MTS1/P16基因在不同組織的腫瘤標本或來源于不同地區同一種組織的腫瘤標本中，其缺失和突變頻率也不同［11］，這一現象提示MTS1/P16基因改變在不同組織的癌變過程中的作用有所不同。造成這種差異的原因尚不清楚，但可能與各臟器組織接受致癌物的種類，劑量以及對致癌物的代謝能力有關。本文結果，MTS1/P16基因在ALL中的高頻率缺失及在ANLL中的改變，提示MTS1/P16基因缺失與急性白血病的發生可能有關。

文獻：

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［2］ArapW,NishikamaK,FurnariFBetal.ReplacementoftheP16/CDKN2genesuppresshumangliomcellgrowth.CancerRes,1995；55:1351

［3］劉明利，樓方定，郭山春etal.淋巴細胞惡性腫瘤P16基因純合缺失和突變的研究.實驗血液學雜志，1998;6(1):49

［4］J.薩姆布魯克,E.F弗里奇,T.曼尼阿蒂斯著.金冬雁譯.分子克隆實驗指南.第2版.北京：出版社,1996：465-467

［5］SerranoM,HannonGJ,BeachD.Anewregulatorymotifincell-cyclecontrolcausingspecificinhibitionofcyclinD/CDK4.Nature，1993；366:704

［6］LiY,NicholMA,ShagJWetal.Transcriptionalrepressionofthed-typecyclin-dependentkinaseinhibitorP16bytheretinoblastomasusceptibilitygeneproductPRb.CancerRes,1994；54:6078

［7］KambA,GruisNA,FeldhausJWetal.Acellcycleregulatorpotentiallyinvolvedingenesisofmanytumortypes.Science，1994；264:436

［8］StranksG,HeightSE,MitchellPetal.DeletionsandrearrangementofCDNKN2inlymphoidmalignancy.Blood，1995；85:893

［9］HebertJ,CayueleJM,BerkeleyJetal.CandidatetumorsuppressorgenesMTS1(P16INK4A),andMTS2(P15INK4B)displayfrequenthomozygousdeletionsinprimarycellfromTbutnotfromB-celllineageacutelymphoblasticleukemias.Blood,1994；84:4038

［10］OgawaS,HangaishiA,MiyawakiSetal.Lossofthecyclindependentkinase4-inhibitor(P16:MTS1)geneisfrequentinandhighlyspecifictolymphoidtumousinprimaryhumanhematopoieticmalignancies.Blood,1995；86:1548

［11］傅松濱.多重腫瘤抑制基因MTS1/P16CDK4I基因與細胞周期調節.國外醫學.遺傳學分冊,1996；19(1)：6