前言：本站為你精心整理了小議磷脂的提取工藝范文，希望能為你的創(chuàng)作提供參考價(jià)值，我們的客服老師可以幫助你提供個(gè)性化的參考范文，歡迎咨詢。

超臨界二氧化碳萃取法和膜分離法使用設(shè)備昂貴、成本高，不適合規(guī)模化生產(chǎn)；無機(jī)鹽復(fù)合沉淀法收率低，且產(chǎn)品有重金屬殘留；溶劑萃取法和電解質(zhì)水溶液法成本低、產(chǎn)量大，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。因此本工作欲將溶劑萃取法和電解質(zhì)水化法結(jié)合起來，即先用飽和食鹽水對(duì)皂腳進(jìn)行破乳，再用乙醚提取磷脂，經(jīng)驗(yàn)證本方法所得粗磷脂純度和收率較高，切實(shí)可行。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料、試劑與儀器

1.1.1材料與試劑棉油皂腳：石河子康隆油脂工貿(mào)有限公司，鉬藍(lán)比色法測(cè)定磷脂含量為21.05%；丙酮、乙醚、氯化鈉、氫氧化鉀、95%乙醇、鉬酸鈉、硫酸聯(lián)胺、氧化鋅、磷酸二氫鉀：分析純。

1.1.2主要儀器及設(shè)備UV-2401PC紫外-可見分光光度計(jì)：日本島津公司；真空冷凍干燥器：英國Edwards公司；BP211D十萬分之一電子分析天平：德國Staotious公司；N-1001V旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：德國EYELA公司；Anke-40B低速大容量離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠；SX-2.5-10型馬弗爐：湖北英山電爐廠。

1.2磷脂含量測(cè)定方法的建立皂腳和粗磷脂中磷脂含量測(cè)定方法的建立參照(GB/T5537—2008)鉬藍(lán)比色法進(jìn)行。

1.3棉油皂腳中磷脂提取方法的優(yōu)選

1.3.1乙醇-乙醚法取100g棉油皂腳，加適量95%乙醇，攪拌均勻，室溫放置24h，加入適量乙醚，調(diào)節(jié)乙醇與乙醚的比例為3:1，再放置24h，過濾，濾渣再以適量乙醇和乙醚(體積比為3:1)的混和溶液浸漬24h，過濾并合并2次所得的濾液，旋蒸濃縮至小容量，濃縮物用體積比為1.5倍的乙醚溶解，加入4倍量的丙酮沉淀，抽濾，用丙酮洗滌3次，冷凍干燥，得粗磷脂。

1.3.2飽和食鹽水-乙醚法取100g棉油皂腳，加入適量飽和食鹽水，攪拌均勻，再加適量乙醚，攪拌均勻，室溫提取2h，以4000r/min離心15min，收集上層乙醚液，濃縮回收乙醚，濃縮物用體積比為1.5倍的乙醚溶解，再加體積比為4倍的丙酮沉淀，抽濾，用丙酮洗滌沉淀3次，冷凍干燥，得粗磷脂。1.3.3乙醚直接提取法除不加飽和食鹽水外，其余與1.3.2完全一致。

1.4正交試驗(yàn)在單因素研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用正交試驗(yàn)考察皂腳與乙醚質(zhì)量體積比(A)、皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比(B)、丙酮與濃縮物體積比(C)3個(gè)因素對(duì)磷脂提取效果的影響，以磷脂提取率為指標(biāo)，采用L9(34)正交表安排試驗(yàn)。

2結(jié)果與討論

2.1磷脂含量測(cè)定方法的建立以吸光度y為縱坐標(biāo)，含磷量x為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=5.8218x+0.0132，在0.02~0.14mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R為0.9998，平均加樣回收率為100.26%，RSD小于2%。

2.2棉油皂腳中磷脂提取方法的優(yōu)選飽和食鹽水-乙醚法之所以優(yōu)于其他2種方法，是因?yàn)轱柡褪雏}水的加入破壞了皂腳的乳化狀態(tài)。皂腳是由中性油、磷脂、皂基、水等組成的混合物，磷脂又是良好的表面活性劑，具有較強(qiáng)的乳化能力，使皂腳處于乳化狀態(tài)，飽和食鹽水的加入，破壞了這種乳化狀態(tài)，使磷脂和其他成分分離開來，故提取率較高。

2.3飽和食鹽水-乙醚法單因素試驗(yàn)

2.3.1飽和食鹽水加入量對(duì)磷脂提取效果的影響取5份皂腳，每份30g，分別按皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比為30:0、30:3、30:6、30:9、30:12加入飽和食鹽水，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2，室溫提取2h，乙醚與濃縮物體積比為3:2，丙酮與濃縮物體積比為4:1。飽和食鹽水對(duì)磷脂收率影響很大，飽和食鹽水加入過少時(shí)，破乳不完全，過多時(shí)，在皂腳內(nèi)部又會(huì)形成局部的W/O或O/W乳化現(xiàn)象，使得在離心時(shí)磷脂和中性油難以分離。當(dāng)皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比為30:3時(shí)，其破乳效果最好，收率最高，為68.92%。因此，皂腳與飽和食鹽水加入體積的最佳比例為30:3。

2.3.2乙醚加入量(用于溶解皂腳)對(duì)磷脂提取效果的影響取5份皂腳，每份30g，皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比30:3，分別按皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:1、1:2、1:3、1:4、1:5加入乙醚，室溫提取2h，乙醚與濃縮物體積比為3:2，丙酮與濃縮物體積比為4:1。磷脂提取率在皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2之前增加較快，之后增加緩慢，在1:4時(shí)提取率達(dá)到最高，且1:2與1:3和1:4時(shí)相比，其提取率相當(dāng)。所以，從節(jié)約成本的角度分析，選擇皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2時(shí)較為經(jīng)濟(jì)。

2.3.3提取時(shí)間對(duì)磷脂提取效果的影響取5份皂腳，每份30g，皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比30:3，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2，提取時(shí)間分別為1、3、5、7、9h，室溫提取，乙醚與濃縮物體積比為3:2，丙酮與濃縮物體積比為4:1。提取時(shí)間對(duì)磷脂提取率影響不大，當(dāng)提取時(shí)間為3h時(shí)，提取率最高，達(dá)73.83%，延長(zhǎng)提取時(shí)間，提取率又逐漸降低。其原因可能是磷脂發(fā)生了部分氧化，導(dǎo)致提取率降低。故取最佳提取時(shí)間為3h。

2.3.4丙酮加入量對(duì)磷脂提取效果的影響取5份皂腳，每份30g，皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比30:3，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2，室溫提取3h，乙醚與濃縮物體積比為3:2，按丙酮與濃縮物體積比為3:1、4:1、5:1、6:1、7:1加入丙酮。丙酮量加入較少時(shí)，磷脂沉淀不完全，當(dāng)丙酮與濃縮物體積比5:1時(shí)，磷脂沉淀較為完全，繼續(xù)加入丙酮，提取率反而下降，其原因可能是沉淀下來得磷脂又發(fā)生了部分溶解，說明雖然磷脂不溶于丙酮，但過量的丙酮還是會(huì)使磷脂發(fā)生少量的溶解。因此，丙酮與濃縮物最佳體積比為5:1。

2.3.5乙醚加入量(用于溶解濃縮物)對(duì)磷脂提取效果的影響取5份皂腳，各30g，皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比30:3，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:2，室溫提取3h，按乙醚與濃縮物體積比為1:1、3:2、2:1、2.5:1、3:1加入乙醚，丙酮與濃縮物體積比為5:1。當(dāng)丙酮加入量一定時(shí)，乙醚加入量越多，溶解的雜質(zhì)和磷脂越多，所以其提取率降低，磷脂純度反而逐漸升高。綜合磷脂純度和提取率兩指標(biāo)，乙醚與濃縮物最佳體積比為3:2。

2.4正交試驗(yàn)按照L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定并計(jì)算磷脂提取率，結(jié)果用極差法及方差分析法進(jìn)行分析，結(jié)果見表3及表4。從表3極差分析可知，各個(gè)因素對(duì)磷脂提取率的影響順序?yàn)锽>C>A，即飽和食鹽水加入量>丙酮加入量>乙醚加入量。由直觀分析可知最佳提取工藝為A3B2C3，即皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:3、皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比為30:3、丙酮與濃縮物體積比為5:1，和單因素考察結(jié)果相符。從方差分析表可以看出，飽和食鹽水加入量及丙酮加入量對(duì)磷脂提取效果影響顯著，乙醚加入量與皂腳的體積質(zhì)量比對(duì)磷脂提取效果具有一定影響，但影響較弱，沒有顯著性。綜合單因素考察及直觀分析，得出自棉油皂腳中磷脂提取的最佳工藝參數(shù)為：皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比為30:3，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:3，室溫提取3h，乙醚與濃縮物體積比為3:2，丙酮與濃縮物體積比為5:1。

2.5驗(yàn)證試驗(yàn)采用以上確定的最佳條件進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表5。磷脂平均提取率為78.52%，RSD值小于2%。

3結(jié)論

通過對(duì)3種磷脂提取方法的比較，得出飽和食鹽水-乙醚法是提取棉油腳磷脂的最優(yōu)方法，其粗磷脂的純度為41.35%，提取率為67.65%。通過對(duì)飽和食鹽水-乙醚法進(jìn)行單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，得出自棉油皂腳中提取磷脂的最佳工藝條件：皂腳與飽和食鹽水質(zhì)量體積比為30:3，皂腳與乙醚質(zhì)量體積比為1:3，室溫提取3h，乙醚與濃縮物體積比為3:2，丙酮與濃縮物體積比為5:1。本工藝成本低廉，工藝簡(jiǎn)單，操作方便，使皂腳能進(jìn)一步得到開發(fā)利用。

作者：趙紅濤，唐輝，應(yīng)雪劉艷芳，賈蔓箐單位：石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆特種植物藥資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室