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3.貫徹實施國防法規,自覺履行國防義務
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【關鍵詞】 胸水; 樣品制備; 雙向電泳; 蛋白質組學
蛋白質組學的發展為體液的研究提供了很好的技術平臺, 涉及血漿、血清、腦脊液、尿液、唾液等體液的蛋白質組學研究正蓬勃發展[1]。體液蛋白質分析對于研究疾病的發病機理、疾病診斷、癌細胞轉移及治療都有重要意義。體液蛋白質為了適合進行雙向電泳分析,也需要做適當處理,除去電泳的干擾物質才能獲得準確的和重復性好的結果。對于體液總蛋白的分離存在的主要問題在于蛋白質豐度的巨大動態范圍和蛋白質在相對分子質量(Mr) 、等電點( pI) 方面的多樣性。本試驗重點探討胸水蛋白質的前期處理方法,試圖建立穩定的胸水蛋白質分離技術,為進一步的胸水蛋白質成分研究奠定基礎。
1 材料與方法
1.1 標本
胸水標本取自南方醫院病理科。
1.2 試劑
硫脲、尿素、二硫蘇糖醇( DTT) 、碘乙酰胺、甘氨酸、CHAPS、甘油均為Sigma 公司產品;固相IPG干膠條(pH 3~10NL, 17 cm) 、IEF buffer ( pH3~10)、覆蓋液、2D Quant kit、Aurum Serum Protein Mini Kit 均購自Biorad公司; 丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、Tris、SDS、丙酮、硝酸銀、甲醛和乙醇、硫代硫酸鈉、碳酸鈉等為國產分析純。
1.3 儀器
IPGphor 等電聚焦儀(Protean IEF cell) 、垂直電泳系統(protean Ⅱ xi cell)購自Biorad公司、Imagescanner 掃描儀( Amersham Biosciences 公司) 、ImageMaster圖形分析軟件,低溫離心機(Beckman公司)。
1.4 樣本制備
1.4.1 離心去除細胞 離體胸水收集后立即4℃,4000轉/分,離心10分鐘,去除細胞成分。收集上清,分裝-20℃凍存。
1.4.2 高豐度白蛋白和IgG的去除 按照Aurum Serum Protein Mini Kit的操作說明,用180μL binding buffer稀釋60μL胸水,加至column孵育15分鐘,收集已去除白蛋白和IgG的過濾液。
1.4.3 丙酮沉淀去除雜質 已去除白蛋白和IgG的過濾液加入4倍體積的預冷丙酮,置-20℃4小時,取出后4℃13 000轉/分,離心10分鐘。棄去上清,再加入少許預冷丙酮沖洗沉淀,4℃13 000轉/分,離心10分鐘,棄去上清。重復一次。收集沉淀,室溫風干。置-20℃凍存。
1.5 蛋白定量
采用2D Quant kit,分別測定未做處理的胸水和已去除白蛋白和IgG并進行丙酮沉淀的胸水濃度。
1.6 雙向電泳
1.6.1 被動水化 分別取240μg未處理的胸水和已去除白蛋白和IgG并進行丙酮沉淀的胸水與水化上樣液(7M尿素,2M硫脲,4%CHAPS,65mMDTT,1%IEF buffer,0.001%溴酚藍)混合,總體積350μL,混勻,均勻加入泡脹槽, 撕開干膠條的保護膜, 膠面朝下覆蓋在混合液上, 1 h后用2~3 ml 礦物油覆蓋膠條, 置室溫水化14 h。
1.6.2 第一向等點聚焦 設置聚焦參數:150 V 3 h、慢速, 250 V 1.5 h、慢速,500 V 1 h、慢速, 1000 V 1 h、慢速, 5000 V 3 h、快速, 10 000 V 至60 000VH、快速。
1.6.3 平衡 等電聚焦電泳結束后, IPG 膠條立即在平衡液A 中緩慢搖蕩平衡15 min, 再在平衡液B中緩慢搖蕩平衡15 min。
1.6.4 第二向SDSPAGE 電泳: 配置13%SDSPAGE凝膠,12mA/膠30 min, 24 mA/膠電泳至溴酚藍線達膠底。
1.7 凝膠染色
按文獻[2]方法進行硝酸銀染色。
1.8 凝膠圖像分析
用Imagescanner透射掃描儀掃描凝膠, ImageMaster 軟件分析比較掃描圖譜。
2 結果
2.1 回收率
表1 經處理后胸水蛋白質的回收率
2.2 樣本處理前后圖譜比較
圖1未進行處理的樣本圖譜中,由于高豐度白蛋白和IgG的掩蓋,背景深,白蛋白及IgG重鏈、輕鏈區蛋白成片,模糊不清,可檢出蛋白點較少(412±24個);圖2樣本經去除高豐度白蛋白和IgG并進行丙酮沉淀處理后,圖譜中檢出蛋白點明顯增多(552±20個),分辨率提高。
3 討論
由于體液成分復雜,各種干擾因素多,上樣前期處理方法效果欠佳,而致體液的蛋白質組學與同期組織細胞的蛋白質組學研究比起來,發展緩慢,明顯滯后。而蛋白質的樣品制備是蛋白質組研究的第一步,無論后續采用怎樣的分離或鑒定手段,樣品制備都是關鍵步驟[3~5]。
胸水與血漿相似,不同的蛋白含量可以相差108~1012 個數量級以上,含有大量的白蛋白、球蛋白等高豐度蛋白,白蛋白含量最多,達35~40mg/mL,占總蛋白含量的50%~70%,IgG占總蛋白含量的10%~25%。而許多低豐度蛋白含量極微, 為pg級。而正是一些種類繁多、性質各異的低豐度蛋白和相對分子質量較小的蛋白,能帶給我們十分重要的信息。然而,利用2DE 方法分離血清蛋白質時,高豐度蛋白的存在會掩蓋許多重要的低豐度蛋白,使其不能被分離出來,而且,IPG 干膠條的上樣量是一定的,高豐度蛋白量多了,也就相對減少了低豐度蛋白的上樣量, 降低了低豐度蛋白的分離效果[6],這也是現有的2DE 方法分離血清蛋白質的缺陷,成為目前這一研究領域的瓶頸。
本試驗應用BIORAD公司的去白蛋白和IgG試劑盒去除高豐度白蛋白和gG, 效果較好, 240μg上樣量圖譜中, 去除白蛋白和IgG以后使一些被白蛋白和IgG遮掩的蛋白質點顯現出來。圖1中未去除白蛋白和IgG,白蛋白、球蛋白的輕鏈及其重鏈區背景較濃, 該區域的蛋白質點分離效果欠佳。圖2去除白蛋白和IgG后,大部分白蛋白被去除,一些被白蛋白和IgG遮掩的蛋白質點顯現出來。處理前前蛋白質點為(412±24)個, 而處理后蛋白質點達到(552±20)個, 蛋白質點明顯增多, 大多數蛋白質點能夠清楚可辨, 胸水蛋白質雙向電泳圖譜質量得到改善。
丙酮沉淀可去除胸水中的脂類、鹽分及經去除高豐度蛋白步驟所結合的雜質等。濃度為55μg/μL的60μL胸水經上述操作,可得到480μg的蛋白,足夠兩次上樣量,蛋白質回收率為14.55%。
侯偉健[7]等人用未處理的胸水標本進行雙向電泳,pH3~10,13cm,500μg的上樣量檢出蛋白質點300個左右。本試驗應用pH3~10NL,17cm,240μg的上樣量,未處理的胸水標本檢出(412±24) 個,檢出率有所提高。
目前對于體液蛋白質組學的研究方興未艾, 血漿或血清蛋白質組學研究較多, 胸水蛋白質組學國內外報道很少, 而胸水成分雖然與血漿相似, 但是由于局限于胸腔的病變有其自身的特點, 所以與血漿成分應還有較多的差別, 胸水蛋白質組學的研究將深化對胸腔內疾病的認識。本研究采用去細胞成分、去除白蛋白和IgG、脫脂、脫鹽等胸水前期處理, 摸索胸水樣品制備方法, 對胸水蛋白質雙向電泳進行探索, 得到了與血漿蛋白質組學相似的圖譜, 重復性好, 初步建立了胸水蛋白質組學雙向電泳技術, 為進一步的胸水蛋白質組學研究打下了基礎。
參考文獻
1 王學紅,盧放根,張洪,等.腹水前期處理滿足雙向凝膠電泳技術的探索.中國醫學工程, 2007,15(3):235~238.
2 Mortz E, Krogh TN, Vorum H, et al. Improved silver staining protocols for high sensitivity protein identification using matrisassisted laser desorption/ionizationtime of flight analysis. Proteomics, 2001, 11: 359~1363.
3 Angelika Gorg, Walter Weiss, Michael J. Dunn.Current twodimensional electrophoresis technology for proteomics. Proteomics, 2004, 4: 3665~3685.
4 Margaret M Shaw, Beat M Riederen. Sample preparation for twodimensional gel electrophoresis. Proteomics, 2003,3: 1408~1417.
5 Link AJ. Internal Standards for 2D. Methods Mol Biol, 1999, 112: 281~284.
關鍵詞:雙語心理詞匯,詞匯學習
1.心理詞匯
心理詞匯(mentallexicon)是心理語言學的一個越來越重要的部分,心理詞匯又叫心理詞典或心理詞庫,是“儲存在永久記憶中的詞及詞義心理表征”(Carrol,1999:102).心理詞匯實則是外部心理詞匯在個體心理內部的表征,由于詞匯是心理語言學的基本單位,因此對雙語心理詞匯的研究就是心理語言學的焦點之一?,F實生活中人能夠辨識與讀出語音、文字及大量詞匯,說明人腦中的確存在一部“心理詞典”或“內部詞庫”。心理詞匯由許多的詞條組成,大量的實驗及語言心理學家都證實了心理詞匯存在音、形、義三個方面的信息。
2.雙語的涵義
雙語者指掌握并能使用兩種或兩種以上語言的人。但對兩種語言的掌握的熟悉程度,不同的研究者持有不同的觀點,Bloomfield(1935)認為雙語者是如同母語般掌握兩種語言的人;Haugen(1957)認為雙語者是。當一個人除了母語外,能夠完整說出意義有意義的話語人。現在這些界定對現實中的實際情況都有一定的出入,比如說如同母語般掌握第二語言,在實際上是很難實現的,而關于Haugen的定義,似乎在理智上是能夠成立的,但是也經不起常識的檢驗。比如說完全沒有學習過英語的人也能講一兩個英語單詞,如hello,bye—bye等,這無疑也是一個完整的表達,但是他缺不能稱為雙語者。所以我們一般把那種能夠在社會實踐中,能經常交替使用兩種語言的人稱為雙語者。此文主要以在掌握母語心理詞匯的基礎上,繼續習得第二心理詞匯的英語學習者為主要論證對象。
3.一語心理詞匯及二語心理詞匯表征形式的對比研究
一語心理詞匯即母語心理詞匯,以漢語為母語的英語學習者在開始學習英語之前,就已經基本形成了母語心理詞匯,在此基礎上習得的二語心理詞匯與母語心理詞匯在形式表征上究竟有何不同,國內外的研究主要圍繞以下三個問題進行實證研究:1)一語心理詞匯與二語心理詞匯是否存在質的差別,那種表征占主導地位?2)一語心理詞匯與二語心理詞匯在儲存空間上是相互獨立還是相互重疊?3)雙語者的兩種語言詞匯的提取是如何實現轉換的?
3.1上述的第一個問題實質上是探索一語與二語心理詞匯結構是否具有相似性。Meara(1984)對受試者進行詞匯的自由聯想實驗,并在此基礎上提出了一語與二語心理詞匯存在著質的不同的觀點,他認為二語詞匯主要由語音關系聯接,而一語詞匯則是以語義聯結為主。張靜淑(2005,106)二語心理詞匯的結構與母語心理詞匯的結構有著顯著的差異。導致這些差異的語言因素主要表現在,(1)二語學習者對英語詞的理解與母語者有明顯的不同,即,二語學習者對詞義的理解不夠準確;(2)二語學習者產生出了大量的詞匯反應。
3.2Jiang(2000)提出了二語心理詞匯的發展性,認為二語心理詞匯在形成初期只有語音及詞形,沒有概念層(指語言的詞義概念特征),在雙語整合階段,二語心理詞匯首先依附于一語概念層,隨著二語詞匯量的增加一語語義被復制成二語語義并逐漸形成二語概念層。桂詩春(1992)認為二語概念層的一些外語單詞和一語的意義即部分重疊,但又不完全重疊,這表明較高水平的雙語者的一語與二語概念層既相互獨立又相互重疊。
3.3Poulise和Bongaerts(1994)建立了雙語者語言產出模型(ModelofBilingualLanguageProduction)用以解釋雙語者是如何實現雙語產出,這一模型的理論支撐是在(Levelt.1989,Levelt,RoelofsMerye,1999)的單語產出模型。在此基礎上提出了改進,該模型認為雙語者產出語言時涉及到三個層面的表征與轉換:概念層,詞目層和語音層。其中概念層表現為概念表征(conceptrepresentation),而詞目層和語言層表現為詞匯表征(lexicalrepresentation),詞匯表征是指語言的詞匯水平的信息特征。雙語者基于概念表征與詞匯表征的不斷完善,從而實現一語到二語及二語到一語之間的不斷轉換。
4.對詞匯學習策略的啟示
在二語心理詞匯形成之前,學習者已經形成了比較完善的一語心理詞匯,根據喬姆斯基的普通語法,學習者已經激活了母語參數設定值。二語心理詞匯是在原有的母語心理詞匯網絡里不斷生成新的節點和聯結,這種聯結包括音、形、義三個方面的不斷發展。
4.1語音的學習
漢語為母語的英語學習者常受到母語單音節性的干擾,而對于英語獨有的語音形式,學習者的母語不斷遷移到二語詞匯的習得過程中,因此,在日常的詞匯學習中,要求學生通過聽讀結合的方式學習詞匯,增加一語與二語之間產生聯系的節點,選擇適當的學習材料,練習強度,與頻率,通過對英語單詞語音的深度加工,不斷積累英語語音詞塊,通過語音詞塊與詞目層的匹配,加深對二語詞匯的習得。
4.2語義的學習
詞匯的另一個重要屬性是詞義,一詞多義在漢語和英語詞匯中都是常見的。傳統的詞匯學習,主要通過背詞形與詞義,往往是拿著詞匯書,從以A開始的單詞背到Z,而很少把詞匯放在語境和二語文化中使用,這樣學習的詞匯局限于字面之義缺乏深度加工。
結語:詞匯學習的最終目的為了能自由流暢的用英語和以英語為母語的人進行跨文化交流,因此詞匯學習不應只是局限于詞項的記憶,而應把詞匯放在文化語境中學習,這樣深度加工的詞匯有助于雙語者不斷重組概念層,形成有效的雙語心理詞匯表征網絡,使雙語者能有效正確地提取包括:語音、語義、搭配、語境等二語心理詞匯知識。(作者單位:江西師范大學外國語學院)
參考文獻:
[1]CarrolDW.PsychologyofLanguage[M].CA;Brooks/ColePublishingCompany,1999.
[2]Meyer,A.S.,Roelofs,A.,&Levelt,W.J.M.WordLengtheffetsinobjectnaming:Theroleofaresponsecriterion[J].JournalofMemoryandLanguage,2003(48):131—147
[3]JiangN.LexicalrepresentationanddevelopmentinaSecondLanguage[J]AppliedLinguistic,2000,21(1):47—77
[4]Poulise,N.,&Bongaerts,T.Firstlanguageuseinsecondlangugeproduction[J]Appliedlinguistics,1994.15:36—57.
回顧過去,展望未來,XXX2004年以來,雙擁工作,被鄉黨委、政府納入我鄉經濟發展和社會穩定的重要議事日程,認真貫徹落實雙擁工作的各項方針政策,各項工作精心組織,合理布局,按照縣雙擁工作的具體要求,立足實際,狠抓落實,各項工作順利圓滿完成,促進了全鄉各項事業的協調發展,現作如下總結:
一、主要作法和成績
(一)領導重視,建立健全機構,完善規章制度
1、自2004年以來,XXX黨委、政府高度重視雙擁工作,切實把雙擁工作拿入我鄉社會經濟發展和部隊建設的總體規劃,作為事關全局,涉及長遠利益的大事來抓,結合本鄉實際,著重抓好相關部門工作,開展形勢多樣,豐富多彩打翻國防教育活動,為我鄉改革發展,穩定起到了積極的推動作用。
2、鄉黨委、政府主要領導親自掛帥,抽調20個部門領導成立雙擁工作領導小組,組成完善的機構,根據各部門的工作性質,制定了具體的規章制度,使之雙擁工作形成制度化、規章化,經?;?、社會化。
(二)國防教育深入人心,雙擁工作社會化,制度化、經?;?/p>
1、學校是培養人才的搖籃和基地,學生是祖國的花朵,未來的希望,國防教育以學校為重點,從學生抓起,每年組織3—5次的學生在清明節,五四青年節,十月國慶節到XX鄉革命陳列室和烈士塔下進行愛國主義和國防教育活動,開展植樹造林等形式多樣的創建活動。
2、武裝工作是國防后勤的戰斗堡壘,抓好武裝工作,提高全民的國防意識,增強軍民關系,有著直接的重要意義,XX鄉人武部每年都要進行2次以上的民兵整組訓練工作,參加軍事訓練都在15—20天,每次參加軍訓人員都不低于35人左右,軍事訓練不僅提了民兵的整體素質,同時增強了全民的國防觀念。每年的民兵訓練,同時也中學生進行軍訓,抽調骨干到學校組織學生軍事培訓,灌輸國防知識,學生軍訓,接受國防教育可達100%
3、把征兵工作作為雙擁活動的熱潮,利用廣播,電視,墻報,黑板報,宣傳標語在全鄉各村各寨大力宣傳國防法,兵役法、兵役條例,優撫政策,宣傳力度做到家喻戶曉,人人皆知,每年積極踴躍應征入伍青年都在80人左右,為我鄉輸送優良兵種提供了有力保證,每年超額完成征兵任務,年年受到上級表彰,2004年征兵任務7人,超額完成3人,2005年7人,超額完成5人。我鄉每年送兵日都要舉行莊嚴肅穆的送兵儀式,中小學生和少先隊員,敲鑼打鼓,鞭炮連天歡送新兵入伍。
4、抓硬件設施,強化宣傳力度,為把雙擁工作做到家喻戶曉人人皆知,在我鄉政府所在地的街道路口制作了一塊永久性宣傳牌,在街道處制作了三條永久性宣傳標語。今年八一建軍節,為紀念78周年建軍節的到來在我鄉街道張貼了數條宣傳標語,把地方建設和部隊建設緊密結合,增強擁軍優屬擁政愛民的良好社會氛圍。
(三)優撫工作扎實有效,雙擁工作有序開展
1、我鄉有老復員軍人82人,烈屬8人,傷殘軍人2人,帶病回鄉退伍軍人5人,三年以來,優撫工作重點突出效果明顯,在認真發放優撫對象各種定補和撫恤金的同時,認真地為優撫對象解決三難問題,三年來共解決優撫對象生活難,治病難,住房難問題共26戶,扶助資金4900元,共發放定補和撫恤金 元 人次。
2、慰問工作有序開展,每年在元旦、春節、八一期間,在鄉黨委政府的統一部署下,認真開展走訪慰問活動發放慰問品、慰問金,3年以來共走訪慰問6次發放雨傘104人把,掛包101人個,雨衣99人件,棉被10人床,人民幣900元。
3、座談會嚴肅認真,效果明顯,我鄉有11個村委會每年春節在鄉黨委政府的統一安排下,各村委會按時召開雙擁工作座談會邀請老復員軍人,退伍軍人現役軍人家屬等優撫對象聚集一堂共討國家大事,今年八一建軍節期間XX鄉黨委召開了全鄉雙擁工作座談會,參加座談會的人員鄉直機關各部門的領導,各村委會主任書記,會議邀請了縣民政局其它部門領導參加,參會人員50多人。
4、優待金的收繳和發放工作,三年以來,我鄉按上級部門的要求,不論面對如何困難,及時收繳優待金,在縣民政局的規定時間內,足額足數地把優待金上繳到縣民政局,由縣民政局統籌統管,積極爭取我鄉現役軍人家屬優待金的早日兌現,三年來我鄉按時兌現優待金 元 人。
二、存在不足和今后努力方向,
1、國防教育有待于加強,雙擁工作力度不大。今后應在全鄉廣大人民群眾中加大對國防教育力度,提高雙擁工作的認識,學校學生是最有宣傳力度,最有傳播力,應當從學校抓起開張形形的創雙擁活動。
一、組織領導(自評得12分)
1、有雙擁工作領導小組或服務組織,有工作計劃、工作制度,有1名聯絡員,全年研究部署雙擁創建工作四次。
2、單位主要領導重視雙擁工作,有分工明確,有工作安排,有參加活動的記錄。
3、目標任務明確,實施計劃具體,保障措施完善,與駐軍簽訂了共建協議,并開展慰問及免費為駐軍防雷檢測活動。
二、宣傳教育(自評得分18分)
年初制定了雙擁宣傳教育計劃,落實了兼職通訊員1人,把全民國防教育和雙擁宣傳教育列入單位重要議事日程,制作了一塊固定的雙擁宣傳標牌,1副墻面永久性標語,出雙擁宣傳欄2期;編發雙擁簡報4期;積極組織開展不同形式的雙擁創建和雙擁宣傳教育的聯誼、聯歡等共建活動。按時完成《中國雙擁》訂閱計劃。
三、擁軍工作(自評得16分)
結合本單位實際,支持國防和軍隊建設,分別為武警中隊、消防大隊免費開展防雷檢測服務;適時開展對駐軍的走訪慰問活動;支持重點軍事工程建設,保護好軍事設施。
四、政策落實(自評得26分)
認真落實國家有關政策,妥善安置轉業退伍軍人,全局共安置轉業軍人一名,聘用退伍軍人一名。在日常工作中,黨員干部深入到擁軍優屬家庭,掌握家庭動態,妥善處理有關問題,幫助轉業退伍軍人解決實際困難。
五、雙擁活動(自評得18分)
雙擁活動制度化、經?;?,主題鮮明,內容豐富。2016年先后與駐軍開了聯誼和慰問活動,還開展形式多樣的合作,請消防官兵幫助開展消防演練,提高我局的消防安全水平。積極參與元旦、春節、建軍節、國慶節等重大節日開展雙擁活動,有文字或圖片資料。
主動完成縣雙擁工委部署的一切雙擁活動任務。
六、共建成效(自評得10分)
與共建單位簽訂共建協議,共建村有優撫對象,并及時給予幫助,落實優撫正常。與共建單位經常開展內容健康的共建活動,通過共建提高了道德規范和雙擁知識知曉率,促進了單位各項工作的開展。
七、加分項目(自評得5分)