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液相色譜儀范文第1篇

關鍵詞：液相色譜技術；高效液相色譜儀；檢定；氣相色譜

中圖分類號：O657文獻標識碼：A文章編號：1009-2374（2009）16-0168-02

高效液相色譜法具有分離速度快，分離效能高，檢測靈敏度高，選擇性能高的特點，而且液相色譜對樣品使用范圍廣，只要求樣品能制成溶液，流動相可選擇的范圍也很寬，因此現在液相色譜在許多領域得到了廣泛的應用。其中高效液相色譜儀是分析實驗室的常用分析儀器之一，它擔負著食品、勞衛等諸多指標的檢測，儀器條件經常變化，色譜柱經常拆卸，因此需要對色譜儀經常檢定以發現儀器性能的變化。但從我國目前的實際情況看，不少使用分析儀器的工作者常因為不熟悉儀器的結構原理，不甚了解儀器的技術指標對分析測定結果的影響，而不能將儀器調整到最佳狀態，從而直接影響到所測定數據的準確性。因此筆者從高效液相色譜儀的組成與基本原理概述出發，探討了檢定液相色譜儀應注意的幾個問題。

一、高效液相色譜儀的組成與原理

高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解析的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分并依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。

二、高效液相色譜儀的主要檢定項目

對氣相色譜儀的檢定，應依據國家計量檢定規程（JJG 700-1999）《氣相色譜儀》，主要檢定項目有柱溫性能、基線噪音、基線漂移、采集系統、檢測器等。

（一）柱溫性能、基線噪音、基線漂移的檢定

對于工廠中使用的某些液相色譜儀，許多色譜柱溫的控制只有恒溫操作或者只使用恒溫操作，從不使用程序升溫控制，此時，可只檢定恒溫的控溫精度和穩定性，對程序升溫控制的重復性指標可暫不檢定。某些氣相色譜儀只承擔氣體樣品的分析任務，且只使用低柱溫，有的甚至在室溫下操作，此時，檢定柱溫時，只能在其使用的色譜柱溫度或者低于老化溫度的狀態下測定柱溫的控溫精度和穩定性，以及基線噪音和基線漂移等指標。否則，柱系統內長期滯留的重組分或雜質將會隨溫度的升高而流出，這將會給基線的穩定帶來極大的影響，甚至會造成低溫固定相的流失或失效。某些承擔組成復雜的樣品分析的氣相色譜儀，配置有多色譜柱、多切換閥的多維色譜分析系統，而且，所配置的數據處理程序和柱切換程序都是專用的。由于柱系統連接復雜，拆換色譜柱困難，且生產控制分析要求不許輕易更改程序和拆換色譜柱，所以，只能在其使用的柱溫條件下檢定柱溫的控溫精度等指標。

（二）色譜數據采集系統的檢定

在檢測過程中，色譜峰面積的記錄一般由原色譜儀所配用的記錄儀、積分儀或色譜數據工作站完成，然后根據所采集的色譜圖或峰面積數據對基線噪音、基線漂移、檢測器的靈敏度或檢測限等指標進行計算。在實際工作中發現，由于積分儀和色譜數據工作站的制造廠家、型號的不同，所得到的峰面積也有所差別，由此計算的檢測器靈敏度或檢測限的差別也較大，有的甚至相差幾倍或十幾倍。為此，我們采用了不同的積分儀和色譜數據工作站對同一臺色譜儀的同一信號進行了采集，并進行了部分數據比較，結果發現所采集的峰積分面積的大小差別較大。試驗表明，HP3392積分儀積分峰面積是C-R6A積分儀積分峰面積的7.95倍（約8倍）；SP4290M積分儀積分峰面積是C－R6A積分儀積分峰面積的2倍。所以，在使用數據處理系統時，應特別注意不同的色譜數據處理系統的積分峰面積的差別，并在計算時加以校正。

（三）檢測器的檢定

檢測器的種類很多，應根據所測物質的特性，選擇適當的檢測器。在高效液相色譜儀中使用最廣泛的為紫外吸收檢測器。它分為固定波長、可變波長和二極管陣列檢測器三種。固定波長紫外吸收檢測器僅由低壓汞燈提供固定波長254nm或280nm的紫外光。可變波長紫外吸收檢測器（UVD），由氘燈和鎢燈作為光源分別提供紫外光和可見光。由于可選擇的波長范圍很大，既提高了檢測器的選擇性，又可選用組分的高靈敏吸收波長進行測定，從而提高了檢測的靈敏度。二極管陣列檢測器（PDAD）是后來發展起來的一種新型紫外吸收檢測器，其可獲得吸收度隨時間與波長的變化的三維空間的立體色譜圖，用于被測組分的定性分析和定量測定。蒸發激光散射檢測器（ELSD）與紫外吸收檢測器相比較，它消除了溶劑的干擾和由于溫度變化引起的基線漂移。值得注意的是，實驗完畢沖洗色譜柱時，首先要關掉檢測器，目的是為了節約光源，保證燈的有效使用，此外，盡量斷開色譜柱與檢測器的連接，防止污染檢測池。

三、高效液相色譜儀檢定應注意的問題

用于工業應用的液相色譜儀大部分項目可按規程要求檢定，但在檢定檢測限這一項技術指標時，常遇到一些困難。比如用于白酒分析的液相色譜儀的檢測器是氫火焰離子化（FID）檢測器，色譜柱主要是DNP-TW填充柱或毛細管柱，規程中規定用標準色譜柱和濃度為100 mg/L的正十六烷-異辛烷標準溶進行檢定，盡管我們把色譜儀的各種氣體流速、柱箱溫度、汽化室溫度、檢測室溫度、儀器衰減等條件一一考慮進去，也不容易得到理想的色譜圖，即使得到符合要求的色譜圖，也花去很多時間，影響企業使用。遇到的問題與檢定方法如下：（1）峰面積重復性差。由于進樣閥漏液或加樣針不到位會影響到峰面積的重復性。檢定方法：進樣閥漏液應更換進樣閥墊圈：并且保證加樣針插到底，注射樣品溶液后需快速、平穩地從LOAD狀態轉換到INJECT狀態，以保證進樣量的準確。（2）主峰不佳或峰分叉。長期使用后的色譜柱，由于有雜質進入，會使色譜柱入口處的固定相“板結”并在流動相所產生的高壓作用下，形成柱頭的塌陷，色譜柱被污染。檢定方法：先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇：異丙醇沖洗柱子，再用甲醇沖洗，然后用純水沖洗，最后甲醇沖洗正向柱子30min以上。

總之，液相色譜儀檢定過程中，每項檢定項目的檢定結果獨立給出，因此，進行檢定結果來源分析及其評定時要針對每項進行。其中儀器型號不同、所使用計量器具不同，其評定結果也不同，應根據實際情況進行分析評定。比如當儀器性能發生變化時，用不同的色譜柱、不同的標準品分別檢定儀器，判定色譜柱和檢測器性能的改變，從而找出引起儀器性能變化的根本原因。

參考文獻

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液相色譜儀范文第2篇

關鍵詞：液相色譜儀；最小檢測濃度；測量不確定；標準溶液；評定

中圖分類號：TS736+.2 文獻標識碼：A文章編號：

對液相色譜儀測量準確值的檢測標準是按照相關的國家計量檢定標準進行檢測的。在使用液相色譜儀進行測量應用中，液相色譜儀的最小檢測濃度的測量不確定情況可以充分反應出液相色譜儀檢測反應的靈敏度，而作為一個測量儀器，液相色譜儀在測量應用中的靈敏度對于測量結果的準確性有著重要的影響。對于液相色譜儀的最小檢測濃度的測量不確定度評定中是通過使用萘或者甲醇作為檢定使用的標準物質進行評定操作的。在應用液相色譜儀進行檢測的過程中，液相色譜儀最小檢測濃度的測量不確定度的影響因素主要有液相色譜儀最小檢測濃度測量過程中的基線噪聲以及重復性測量誤差、檢測使用標準溶液的濃度情況等。本文主要通過液相色譜儀最小檢測濃度的測量試驗與最小檢測濃度不確定度的計算，對液相色譜儀最小檢測濃度的測量不確定度進行評定。在液相色譜儀最小檢測濃度的測量試驗中，主要是通過應用標準物質溶液使用液相色譜儀進行最小濃度檢測操作，并且在檢測操作過程中，根據試驗操作情況在檢測儀器穩定的情況下，進行一定時間段的基線情況采集并進行噪聲值的計算，同時在檢測使用的標準溶液中取一定數量標準的溶液，進行重復的進樣，并且測量出標準溶液樣品的最小檢測濃度。

1、液相色譜儀最小檢測濃度計算的數學模型

在應用相關數學原理進行液相色譜儀最小檢測濃度的結果計算中，對于液相色譜儀的最小檢測濃度的計算是通過基線噪聲情況與檢測使用標準溶液的濃度、重復檢測過程中標準溶液的峰高值情況、檢測過程中進入檢測應用的標準溶液樣品的體積等之間的相互關系，從而計算出液相色譜儀最小檢測濃度的情況。如下公式關系所示。

上述公式中，CL表示液相色譜儀的最小檢測濃度值，Nd表示的是液相色譜儀最小檢測濃度過程中的基線噪聲值，c表示的是液相色譜儀最小檢測濃度過程中使用的標準溶液的濃度情況。最后，H表示在液相色譜儀最小檢測濃度過程中標準溶液的峰高值，V則表示液相色譜儀最小檢測濃度檢測中標準溶液的進樣體積值。

2、液相色譜儀輸入量標準的不確定度評定

對于液相色譜儀最小檢測濃度測量過程中輸入量的標準不確定度的評定主要包括進行液相色譜儀最小檢測濃度的測量過程中的對于基線噪聲以及檢測使用標準溶液峰高、標準溶液的濃度、標準溶液在進行液相色譜儀最小檢測濃度的測量中進樣體積等測量的不確定度的評定。

2.1 液相色譜儀測量中基線噪聲測量不確定情況

在進行液相色譜儀最小檢測濃度的測量過程中，對于液相色譜儀最小檢測濃度測量過程中的基線噪聲值的測量，最開始使用的是積分儀或者使用卡尺進行液相色譜儀最小檢測濃度檢測過程中的基線噪聲值的測定的，使用這種基線噪聲測量儀器進行液相色譜儀最小檢測濃度測量過程中的基線噪聲值的測量，一般情況下，對于基線噪聲值的測量結果的不確定性在0.02左右。現在對于液相色譜儀最小檢測濃度的測量中的基線噪聲的測量使用的是色譜工作站進行測量應用的。使用色譜工作站進行液相色譜儀最小檢測濃度測量中的基線噪聲情況的測量要比最開始使用的測量儀器進行基線噪聲值測量的不確定度結果要相對好一些，使用色譜工作站進行基線噪聲情況的測量，其測量過程中的不確定度一般要小于0.01。如果在對基線噪聲測量的過程中，基線噪聲是一個均勻分布的狀態，那么使用色譜工作站進行基線噪聲值的測量應用，那么基線噪聲的測量不確定度為0.006，并且這種不確定度在液相色譜儀最小檢測濃度測量中，其基線噪聲的測量不確定度的還具有一定的可靠性和自由變化值。如下所示。

自由變化情況為

2.2 標準溶液的峰高值不確定情況

在液相色譜儀最小檢測濃度的測量不確定度中就有測量使用標準溶液的峰高值的不確定度造成的。對于液相色譜儀最小檢測濃度過程中測量使用標準溶液的峰高值的不確定誤差主要是在進行檢測過程中由于人為操作或者定量環體積、環境因素、色譜數據處理系統等情況原因造成的。假設進行檢測使用的標準溶液是萘，現在對于萘的峰高值不確定度進行評定。假設進行液相色譜儀最小檢測濃度的測量不確定度評定的試驗應用的是特定型號的液相色譜儀，并配備有專門進行基線噪聲監測的色譜工作站，那么取有一定標準量的萘溶液進行定量的循環進樣，那么，每次進樣循環的萘溶液峰高值結果如下表1所示。

表1 萘溶液進樣峰高值

根據上表中的萘峰高值結果情況就可以計算出萘的平均峰高值結果為0.820，同樣對于液相色譜儀最小檢測濃度測量不確定度評定試驗中每次實驗萘峰高值的誤差也可以通過相關公式關系計算得出，那么，萘溶液的峰高值不確定情況就如下所示。

2.3 檢測試驗中標準溶液的濃度不確定情況

在進行液相色譜儀最小檢測濃度的測量不確定度評定試驗中，檢測使用的標準溶液的濃度情況也是對于檢測測量不確定產生影響的因素之一。因此，對于液相色譜儀最小檢測濃度測量不確定度的評定也需要對于使用標準溶液的濃度不確定情況進行評定計算。在對于標準溶液的不確定度的評定中是根據國家相關中心單位給定的單位標準溶液的濃度不確定值進行實驗使用標準溶液的數量進行濃度不確定情況的評定的。

2.4 應用標準溶液的進樣體積不確定情況

根據上文中對于液相色譜儀最小檢測濃度值的計算公式可以知道，要想得出最終的液相色譜儀最小檢測濃度情況，還需要有檢測應用標準溶液的進樣體積值。同樣液相色譜儀最小檢測濃度的測量不確定情況也是與應用標準溶液進樣體積的不確定情況有關的。根據相關關系，標準溶液的進樣體積的不確定情況為0.01，其中自由變化情況是

3、液相色譜儀最小檢測濃度測量不確定度的評定

根據上述液相色譜儀最小檢測濃度情況的數學公式以及對于液相色譜儀最小檢測濃度的測量不確定度產生影響的基線噪聲不確定度、標準溶液濃度不確定度以及標準溶液進樣體積不確定度等，在綜合液相色譜儀最小檢測濃度檢測標準不確定度和合成標準不確定度的評定、對擴展不確定度的評定等情況，液相色譜儀最小檢測濃度的測量不確定度為0.046，有效自由度為50。

4、結束語

總之，液相色譜儀最小檢測濃度的測量不確定度情況受到基線噪聲的不確定度、標準溶液濃度的不確定度以及標準溶液進樣體積的不確定度等的影響，因此，對于液相色譜儀最小檢測濃度的測量不確定度中應注意從這些影響因素中進行綜合考慮評定。

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液相色譜儀范文第3篇

論文關鍵詞：高效液相色譜儀；水環境；監測；前景

一、高效液相色譜儀及其技術簡介

高效液相色譜（HPLC)也叫高壓液相色譜、高速液相色譜、高分離度液相色譜等。是在經典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。又因分析速度快而稱為高速液相色譜。

高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器(能檢測色譜柱流出組分及其量的變化的器件。指機械的、電子的或化學器件，用于區分、記錄或指示環境中某一變量的變化，如溫度、壓力、電荷、電磁輻射、核輻射、粒子或分子等。)時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。

二、高效液相色譜儀的應用

高效液相色譜儀在水環境監測中的應用主要分為三個方面：一方面是對傳統監測項目指標的監測；一方面是針對水體中的有機物進行監測；另一方面是利用其高效分離的技術特點在對水體中污染物質總量的監測的基礎之上對不同價態及其形態的污染物進行分類定量監測。

（一）對傳統污染物的監測

對傳統污染物的監測主要是針對日常水體中常見污染物的重點監測。根據國家的相關要求及其本站的實際監測條件，對水體中主要污染物的監測包括了重金屬元素（銅、鋅、砷、汞、鎘、鉻等）、營養元素（氮、磷、鉀等）、特殊元素（硒、氯、硫等）。通過如上監測對水體的日常污染狀況進行把握與評價。同時，傳統污染物的監測還包括了對特定企業排污點的污水監測，作為其環保達標的重要依據。

（二）對水體中的有機物

在傳統的污染物的基礎之上工業以及農業淋容等多方面因素會對水體中造成一定的有機物污染，在針對有機物的污染監測過程中傳統的監測方法無法在精度與效率方面達到要求。在此方面應用高效液相色譜儀在對有機物進行定型的同時進行定量的監測。主要監測的項目包括了，工業有機污染物（氰化物、）揮發酚、石油類、總有機物等）、農業有機物（如殺蟲劑、除草劑、消化抑制劑）、特殊有機物（微生物代謝物、醫療污染物、生活污水等）。針對如上的有機物監測一方面能夠對水體中有機污染現狀進行評價，另一方面可以鑒別污染物種類進而對排查污染源提供一定的幫助。

（三）對不同價態及其形態的污染物的監測

同種化學元素的不同存在價態以及形態對其生物毒性的影響至關重要。比如鉻元素在水體中存在三價與六價之分，其中三價鉻毒性較小且對在較大濃度范圍內對人體有益，而六價鉻則表現為較強的生物毒性，在較低濃度下對人體造成較大危害。在水環境的監測過程中傳統的六價鉻的監測方法是利用六價鉻與二苯碳酰二肼的顯色反映進行檢測的。這種檢測方式由于收到氧化還原條件的影響容易造成較大誤差，進而使得對水體環境的判斷失準。采用高效液相色譜儀能夠同時監測同種元素的不同價態進而對水體的污染物及其毒性進行更好的定量分析，為后續的環境評價與治理奠定基礎。

三、高效液相色譜儀的特點

（一）高效液相色譜儀的準確性

與傳統的檢測方法相比較，高效液相色譜儀具有更高的準確性，這種準確性主要表現在兩個方面：一方面高效液相色譜儀為全自動檢測儀器，在避免了人為誤差出現的同時降低了機械誤差。而機械誤差經過標準物質的校訂之后可以得到很好的控制，這就決定了高效液相色譜儀在監測過程中誤差較小。同時，在另一方面高效液相色譜儀在監測原理上同樣優于傳統的監測方法，以火焰原子吸收測量水體中的重金屬濃度為例，其以火焰原子激發的峰值為測定濃度結果，在測定過程中的波動式消耗會使得測量結果較實際濃度偏低的現象。而采用高效液相色譜儀則是利用全部曲線的面積來代替相對體積內的總量，在計算優化方面更具備準確性。

（二）高效液相色譜儀的高效性

高效液相色譜儀的高效性主要表現為三個方面：

1、高效液相色譜儀的檢測效率本身，樣品從進樣到出結果僅需要30秒作用的時間對于單向測定，此時間還具有一定的下降空間。

2、高效液相色譜儀的多重測定效率。在針對多項目的測定過程中。利用高效液相色譜儀進行測定可以單次進樣多指標共同檢測的效果，大大的降低了進樣的重復性工作，提高了整體的工作效率。 　3、高效液相色譜儀的連續進樣機制，在前一樣品轉移到檢測室后，后一樣品既可以做進樣處理，在監測相同的項目指標的情況下，連續進樣與單獨進樣的監測效率提高越30%。

此外，通過高效液相色譜儀與質譜儀的連用可以實現在定量分析的基礎之上進行定性的監測。一方面省略了定性檢測的二次步驟，另一方面降低了樣品前處理的難度與過程。進而，降低了監測的時間。

（三）高效液相色譜儀的廣泛性

高效液相色譜儀的廣泛性主要表現為對監測物質的廣泛性，其監測項目幾乎涵蓋了水體環境監測的所有基礎項目。包括了重金屬的測定、營養元素的測定、其他離子的測定、不同價態的測定、有機物的測定等等諸多方面。尤其是其針對有機物的測定方面還可以細致劃分為多環芳烴類化合物的測定、酚類化合物的測定、苯胺類化合物的測定、鄰苯二甲酸酯類化合物的測定、氯聯苯和鹵代化合物的測定、苯基脲類化合物的測定、酞酸酯類化合物的測定等等。幾乎涵蓋了所有類別的污染物種類，使得在實際的操作過程中可以根據不同的監測目標與監測目的進行合適的項目選擇。

四、高效液相色譜儀的應用前景

（一）與評價軟件連用

高效液相色譜儀與評價軟件連用主要是利用高效液相色譜儀的數據收集功能以及數據計算功能。在高效液相色譜儀對數據計算的基礎上結合電腦的評價軟件對獲得數據進行進一步處理的過程。通過與評價軟件的連用可以達到在監測的過程中根據不同的監測目的進行合理的評價結果輸出的方式。進一步使得環境監測具有高效化與準確性。

在具體的操作層面其可能應用主要分為兩個方面：一方面是利用評價軟件的評價功能對超標樣品進行篩選。在測定前利用標準物質對環境標準進行測定。而在測定的過程中利用評價軟件的篩選功能自動對超標樣品進行報警或者標紅處理，而對于未超標樣品則可以采用忽略的處理方式。最終的數據輸出結果為超標樣品編號與濃度。這樣能夠有效的降低環境監測站的工作強度。

另一方面是利用預設的國家標準以及不同污染物的環境效應權重針對同一樣品的權指標測定項目進行評價報告的生成。在測定的過程中自動的對比國家環境標準，進而生成科學的環境評價報告，為后續的環境治理提供一定的依據。

（二）與質譜儀連用

高效液相色譜儀只能夠定性的分析被監測物質，或者通過對吸收光譜的設定來測定特定物質的濃度，而對于未知物質的監測則存在一定的不足。此方面的缺陷使得其在使用的過程中測定項目具有一定的盲目性。通過高效液相色譜儀與質譜儀的連用可以在同一樣品測定的情況下測定未知樣品中的特定物質種類以及物質濃度。方便并拓寬了水環境監測的廣度。

（三）與連續進樣裝置的連用

高效液相色譜儀具有一定的連續進樣能力。但是，此種進樣依舊采用手動的模式進行。在手動模式下，一方面對進樣效率的提高程度不顯著。另一方面則表現為對進樣的準確程度不精確。因此，采用高效液相色譜儀與連續進樣裝置的連用在進一步提高工作效率的同時，保障了進樣的準確性與測定的自動化程度。在效率與精度方面對高效液相色譜儀的檢測均是一種提高。

液相色譜儀范文第4篇

關鍵詞：醫藥院校；高效液相色譜；管理

高效液相色譜法是儀器分析的一種重要方法[1]，是醫藥院校中醫學類、藥學類及其相關專業必需的實驗課內容，是實踐性操作性專業性很強的一種分析方法，在教學和科研方面為培養技能型醫藥專才發揮著重要作用。高效液相色譜適用于分析受熱不穩定易分解的、高沸點、不易揮發的、分子量較大、不同極性的天然和合成有機化合物，應用范圍十分廣泛，具有高效率、高分辨率、高靈敏度、高速度的特點。而且，儀器十分昂貴，并要經常維護，因而，對于高效液相的管理提出了很高的要求。

1制度管理

建立和完善高效液相色譜相關管理制度，使管理制度科學化合理化規范化，在學校和學院層面建立《高效液相色譜使用、維護管理制度》，加強管理。由于使用人員較多，要實行提前預約制度，按照預約時間排隊。儀器使用前要熟悉儀器操作規程，不得做與實驗無關的參數設置；不得拆卸儀器，有問題要及時匯報。因實驗人員使用不當造成的儀器或軟件損壞由實驗者或其負責人負責盡快維修。實驗數據存放建立的文件夾，以實驗者名字命名，數據拷貝用專用U盤，不得擅自在電腦里安裝軟件，確實需要安裝需經過管理者同意。使用者要經過專業的操作培訓，合格后方可單獨操作儀器。通過規范化的制度管理，不但能提高儀器的使用率，還能延長儀器的壽命。

2規范化操作管理

進行高效液相色譜實驗時，每個環節的操作，直接影響實驗的成敗，有些失誤甚至會造成儀器不同零部件的損壞，因而每個操作都要嚴謹和細致，因此有必要規范化操作，制定標準的操作流程。以普通的高效液相色譜儀為例，具體步驟要有嚴格的先后操作順序：（1）過濾流動相，根據需要選擇不同的濾膜。（2）對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。（3）打開HPLC工作站（包括計算機軟件和色譜儀），連接好流動相管道，連接檢測系統。（4）進入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。（5）有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10ml/min。（6）調節流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。（7）設計走樣方法。點擊file，選取selectusersandmethods，可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊newmethod。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩流，一般2~5分鐘；b.基線歸零；c.進樣閥的loading-inject轉換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。（8）進樣和進樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數據和做標記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。（9）關機時，先關計算機，再關液相色譜。只有規范具體的操作流程，才能更好地進行分析實驗，獲得準確真實科學的實驗數據，才能更好地維護好高效液相色譜儀器。

3維護管理

在使用高效液相色譜色譜儀器后一定要做好維護管理，一般來說最好的維護就是經常規范性使用，在操作使用時充分了解儀器的注意事項，做到科學分析合理使用。流動相需采用色譜純溶劑，水須為超純水，準備所需的流動相，以滿足儀器要求，避免損壞色譜柱;超純水須當天配當天用；進樣或溶劑進入色譜柱前須經徹底的排氣，嚴禁氣泡進入色譜柱;流動相進入色譜柱后要檢查流路有沒漏液，特別是色譜柱的接頭；嚴禁100%水進入反相色譜柱，需有一定的有機溶劑比例；嚴禁使用沒經濾膜過濾的溶劑沖洗色譜柱，避免將互不相溶的溶劑一同進入泵內；流動相需經過濾、除氣后方可使用，用適合的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣20~30min；待分析的樣品必須徹底溶解澄清、過濾，配制樣品和標準溶液，用合適的0.45μm濾膜過濾，以避免堵塞、損壞色譜柱，所有通過色譜柱的液體須經嚴格過濾；流動相的比例須逐步過渡，不能跨度太大；流速不論是由慢到快還是由快到慢也須逐步過渡，最大流速一般不超過10ml/min；分析完成后，須及時清洗色譜柱和檢測器的比色池，原則上先用流動相沖洗30min，再逐步過渡到100%有機溶劑（甲醇或乙腈）沖洗30min，嚴禁由一種溶劑馬上變換另一種溶劑，酸堿鹽類須先由90%水:10%甲醇沖洗30~60min，再逐步過渡到100%甲醇沖洗。長時間不用色譜柱，要沖洗好后，用純甲醇或乙腈封存普通；C18柱盡量避免在40℃以上的溫度下分析，定期測柱效，有下降，可以用10％異丙醇甲醇沖洗色譜柱。每次實驗后要做好登記使用記錄，長時間不用時，管理人員應該定期檢查高效液相色譜各個部件的狀況，做好相關的維護措施。

液相色譜儀范文第5篇

【關鍵詞】 元胡止痛片；，，延胡索乙素；，，高效液相色譜

摘要：目的建立元胡止痛片中延胡索乙素的含量測定方法。方法C18ODS色譜柱 (4.6 mm×250 mm， 20 μm) ； 流動相：甲醇0.1%磷酸溶液（三乙胺調pH值至6.0）(55∶45)；檢測波長：280 nm；流速：1.0 ml?min1。結果延胡索乙素對照品在0.153 2~0.766 0 μg范圍內，進樣量與峰面積間呈良好的線性關系，r=0.999 99，平均回收率為99.53%。結論該方法操作簡便，結果準確，重現性好，可用于控制該制劑的質量。

關鍵詞：元胡止痛片； 延胡索乙素； 高效液相色譜

元胡止痛片是2005版《中國藥典》［1］收載品種，由延胡索（醋制）、白芷2味中藥組成。具有理氣、活血、止痛功能，用于氣滯血淤的胃痛、脅痛、頭痛及痛經等。是中藥止痛著名方劑。現代研究表明，延胡索乙素具有較強的鎮痛，鎮靜，催眠等藥理作用［2］。因此，該成分是元胡止痛片中的有效活性成分之一。2005版《中國藥典》［1］收載的元胡止痛片中延胡索乙素的含量測定方法為薄層色譜掃描法，操作比較復雜。本實驗采用HPLC法改進延胡索乙素的含量方法，并對測定方法學進行了研究。

1 儀器與試劑

儀器：高效液相色譜儀(日本島津CLASSVP 10AVP)；C18ODS色譜柱 (4.6 mm×250 mm， 20μm) (大連依利特) ；HP1050/3D化學工作站；樣品：元胡止痛片，自制；對照品：延胡索乙素對照品，批號：110726200208，供含量測定用（中國藥品生物制品檢定所提供）； 試劑：所用試劑均為分析純、色譜純；水為重蒸餾水(自制)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性實驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺調pH值至6.0）(55∶45)為流動相；流速1.0 ml?min1，檢測波長280 nm；理論板數按延胡索乙素峰計算應不低于3 000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成每毫升含46 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備取本品10片，除去糖衣，研細，取細粉0.50 g，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入濃氨試液甲醇(1∶20)混合溶液50 ml，稱定重量，冷浸1 h后加熱回流1 h，放冷，再稱定重量， 用濃氨試液甲醇(1∶20)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液25 ml，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5 ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 線性關系考察 精密稱取延胡索乙素對照品3.83 mg至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，得混合對照品原液（153.2 μg/ml）。精密吸取對照品原液1，2，3，4，5 ml，分別至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進樣量(X)對峰面積(Y)作圖，得到其標準曲線圖。得回歸方程Y=3.94×107 X+0.027 51，r=0.999 99， n=5。延胡索乙素對照品在在0.153 2~0.766 0 μg范圍內，進樣量與峰面積間呈良好的線性關系。

2.5 精密度實驗 準確吸取上述對照品溶液10.0 μl，注入液相色譜儀，測定峰面積值，重復進樣6次，RSD為0.42%。結果表明，本法精密度較好。

2.6 穩定性實驗 取同一供試品溶液，分別于1，2，3，4，5，6 h測定延胡索乙素的峰面積值， RSD為0.78%，結果顯示供試品溶液在6 h內穩定。

2.7 重復性實驗 對同一批樣品平行制備5份供試液，分別取10.0μl，注入液相色譜儀，進行含量測定， RSD為1.96%。表明本法重現性較好。

2.8 陰性對照實驗 取缺延胡索的處方藥材，按工藝制備制成缺延胡索的陰性制劑，照供試品溶液制備方法制成陰性溶液，分別吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性溶液各10.0μl，注入液相色譜儀，按上述條件進行測定，記錄色譜圖，從色譜圖中可以看出，方中其它成分在本測定條件下，對延胡索乙素的含量測定無干擾。見圖1~3。

圖1 對照品色譜圖（略）

圖2 樣品色譜圖 （略）

圖3 陰性樣品色譜圖（略）

2.9 加樣回收率實驗精密稱取已知含量的同一批號樣品（延胡索乙素含量為0.45 mg/g）9份，分為3個濃度組，稱樣量分別為0.17，0.25，0.32 g，每組3份，均精密稱定，3個濃度組分別精密加入對照品原液（延胡索乙素含量為0.1532 mg/ml）0.9，0.7，0.5 ml，按供試品溶液制備方法及上述色譜條件測定，計算加樣回收率。結果見表1。

2.10 供試樣品的含量測定 分別取不同批號的樣品，按本方法的測定條件，分別測定各樣品中延胡索乙素的含量。結果見表2。

表1 延胡索乙素加樣回收率實驗（略）

表2 3批樣品中延胡索乙素含量測定結果（略）

3 討論

3.1 延胡索是元胡止痛片處方中的君藥，延胡索乙素是延胡索的主要活性成分之一，因此建立元胡止痛片中延胡索乙素的含量指標具有一定的實際意義。本文的HPLC測定條件不受方中其它成分的干擾，專屬性較強，測試結果比較準確，可用于該制劑的質量控制。

3.2 在供試品溶液的制備方法中，我們曾選用甲醇超聲處理30 min，乙醇超聲處理30 min，氯仿超聲處理30 min，濃氨試液甲醇(1∶20)混合溶液超聲處理30 min，濃氨試液甲醇(1∶20)混合溶液加熱回流提取等方法，結果以濃氨試液甲醇(1∶20)混合溶液冷浸1 h后，加熱回流提取1 h，供試液測定值最高，故確定以濃氨試液甲醇(1∶20)混合溶液加熱回流提取制備供試液。

參考文獻