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雙向調(diào)控范文第1篇

【關(guān)鍵詞】金融調(diào)控 房地產(chǎn) 金融 雙向影響

房地產(chǎn)行業(yè)在近年來(lái)的發(fā)展中取得了較好的經(jīng)濟(jì)效益，房地產(chǎn)行業(yè)的規(guī)模逐漸擴(kuò)大，對(duì)國(guó)家的經(jīng)濟(jì)建設(shè)做出了重要的貢獻(xiàn)。但是當(dāng)前我國(guó)的房地產(chǎn)行業(yè)發(fā)展過(guò)快，房?jī)r(jià)增長(zhǎng)過(guò)快，這對(duì)于房地產(chǎn)行業(yè)的長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展有著十分不利的影響，同時(shí)也不利于民生的發(fā)展。國(guó)家采用金融調(diào)控的方式對(duì)房地產(chǎn)行業(yè)進(jìn)行調(diào)控，穩(wěn)定房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展。金融調(diào)控對(duì)于房地產(chǎn)行業(yè)和金融行業(yè)都有著重要的影響，國(guó)家應(yīng)該充分重視金融調(diào)控手段的使用，發(fā)揮出應(yīng)有的作用，更好地促進(jìn)國(guó)家經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。

一、當(dāng)前我國(guó)房地產(chǎn)金融調(diào)控的政策

隨著房?jī)r(jià)的不斷上漲，國(guó)家采用一系列政策對(duì)房?jī)r(jià)進(jìn)行有效的調(diào)控，穩(wěn)定房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展。金融調(diào)控政策是比較常見(jiàn)的調(diào)控政策，對(duì)于穩(wěn)定國(guó)家經(jīng)濟(jì)的發(fā)展有著十分重要的作用。金融調(diào)控主要是指國(guó)家運(yùn)用經(jīng)濟(jì)法律和行政手段對(duì)國(guó)家的金融市場(chǎng)進(jìn)行調(diào)節(jié)，保障金融體系的穩(wěn)定運(yùn)行，穩(wěn)定物價(jià)和國(guó)際收支平衡。

當(dāng)前我國(guó)為了更好地抑制房地產(chǎn)行業(yè)發(fā)展過(guò)快，采取了一系列的金融調(diào)控政策穩(wěn)定經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。當(dāng)前銀行的信貸資金漸漸收緊，銀行的信貸門(mén)檻逐漸增加，這在一定程度上減少了銀行貸款，降低了房地產(chǎn)行業(yè)的熱度。近年來(lái)國(guó)家逐漸控制買(mǎi)房的銀行貸款，對(duì)首付的貸款進(jìn)行嚴(yán)格的限制。同時(shí)國(guó)家又出臺(tái)了限購(gòu)政策，一方面維護(hù)市民的利益，另一方面穩(wěn)定房地產(chǎn)市場(chǎng)的發(fā)展。國(guó)家采用緊縮性的金融政策維護(hù)房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展，保持國(guó)家經(jīng)濟(jì)發(fā)展的健康趨勢(shì)，對(duì)于人民生活的穩(wěn)定和國(guó)家的穩(wěn)定有著十分重要的作用。

二、房地產(chǎn)金融調(diào)控對(duì)于房地產(chǎn)行業(yè)的影響

當(dāng)前國(guó)家對(duì)于房地產(chǎn)市場(chǎng)的發(fā)展進(jìn)行了嚴(yán)格的管理和限制，對(duì)房地產(chǎn)行業(yè)進(jìn)行規(guī)劃，維護(hù)房地產(chǎn)行業(yè)的健康發(fā)展有著十分重要的作用。隨著國(guó)家經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展速度過(guò)快這不僅不利于房地產(chǎn)市場(chǎng)的長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展，同時(shí)也會(huì)影響人民群眾的正常生活。國(guó)家采用金融政策對(duì)房地產(chǎn)行業(yè)進(jìn)行調(diào)控對(duì)房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展主要有以下幾個(gè)方面的影響：

（一）降低房地產(chǎn)行業(yè)發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)

近年來(lái)房地產(chǎn)行業(yè)發(fā)展速度過(guò)快，房?jī)r(jià)逐漸升高，不僅給人們的生活造成了影響，同時(shí)也對(duì)國(guó)家經(jīng)濟(jì)的發(fā)展構(gòu)成了一定的威脅。國(guó)家采用緊縮性的金融政策對(duì)房地產(chǎn)行業(yè)進(jìn)行調(diào)整在一定程度上可以有效地降低房地產(chǎn)行業(yè)發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)。房地產(chǎn)行業(yè)發(fā)展過(guò)快，銀行貸款逐漸增加，如果房?jī)r(jià)過(guò)高不能及時(shí)售出將會(huì)引發(fā)金融危機(jī)，影響房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展和國(guó)家的經(jīng)濟(jì)建設(shè)。但是國(guó)家采用政策控制房地產(chǎn)行業(yè)的銀行貸款可以有效降低風(fēng)險(xiǎn)，穩(wěn)定房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展。

（二）規(guī)范房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展

當(dāng)前房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展競(jìng)爭(zhēng)十分激烈，房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展缺少相應(yīng)的規(guī)范，這對(duì)于房地產(chǎn)行業(yè)的長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展有著十分不利的影響。加強(qiáng)房地產(chǎn)行業(yè)的金融調(diào)控可以有效地規(guī)范房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展。對(duì)房地產(chǎn)行業(yè)的規(guī)模進(jìn)行有效的控制，對(duì)一些不合理的房地產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行有效的調(diào)整和規(guī)劃，促進(jìn)房地產(chǎn)企業(yè)的良性健康發(fā)展，穩(wěn)定房地產(chǎn)市場(chǎng)。

三、房地產(chǎn)金融調(diào)控對(duì)于金融行業(yè)的影響

金融調(diào)控作為國(guó)家調(diào)控政策的主要手段之一，對(duì)于穩(wěn)定國(guó)家的經(jīng)濟(jì)發(fā)展有著十分關(guān)鍵的作用。金融調(diào)控政策對(duì)于調(diào)控房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展有著重要的作用，同時(shí)對(duì)于金融行業(yè)的發(fā)展也有著十分重要的作用。

（一）有利于防范金融風(fēng)險(xiǎn)

隨著國(guó)家銀行貸款業(yè)務(wù)的發(fā)展，商業(yè)銀行在房地產(chǎn)行業(yè)中占據(jù)著十分重要的位置，商業(yè)銀行基本上參與了房地產(chǎn)開(kāi)發(fā)的全過(guò)程。金融調(diào)控政策可以有效地降低房地產(chǎn)行業(yè)的貸款金額，對(duì)于降低貸款風(fēng)險(xiǎn)，維護(hù)商業(yè)銀行的利益有著重要的作用。這在一定程度上可以降低金融風(fēng)險(xiǎn)，保障市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。

（二）有利于促進(jìn)商業(yè)銀行的結(jié)構(gòu)調(diào)整

國(guó)家采用緊縮性的金融政策降低房地產(chǎn)行業(yè)的貸款數(shù)額，對(duì)于商業(yè)銀行的影響是很大的，商業(yè)銀行的貸款業(yè)務(wù)減少，在一定程度上影響了商業(yè)銀行的經(jīng)濟(jì)效益。商業(yè)銀行為了維護(hù)銀行的利益會(huì)考慮開(kāi)展多種銀行業(yè)務(wù)，保障商業(yè)銀行的發(fā)展。這對(duì)于商業(yè)銀行的業(yè)務(wù)結(jié)構(gòu)調(diào)整，促進(jìn)商業(yè)銀行的發(fā)展有著重要的促進(jìn)作用。

四、結(jié)語(yǔ)

我國(guó)的房地產(chǎn)行業(yè)對(duì)于國(guó)家的經(jīng)濟(jì)建設(shè)做出了重要的貢獻(xiàn)，房地產(chǎn)行業(yè)也取得了較好的經(jīng)濟(jì)效益。當(dāng)前房地產(chǎn)行業(yè)的規(guī)模逐漸擴(kuò)大，房地產(chǎn)行業(yè)的競(jìng)爭(zhēng)也逐漸激烈，但是房地產(chǎn)行業(yè)為了擴(kuò)大規(guī)模，貸款數(shù)額逐漸增加，這對(duì)于國(guó)家的經(jīng)濟(jì)發(fā)展和銀行的發(fā)展造成了一定的威脅。國(guó)家應(yīng)該積極利用金融政策對(duì)房地產(chǎn)行業(yè)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整，保障房地產(chǎn)行業(yè)的健康發(fā)展。房地產(chǎn)金融調(diào)控政策是國(guó)家調(diào)整房地產(chǎn)行業(yè)發(fā)展采用的主要措施，金融調(diào)控政策對(duì)于房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展和金融行業(yè)的發(fā)展都有著十分積極的作用。今后房地產(chǎn)行業(yè)的發(fā)展還需要國(guó)家金融政策的進(jìn)一步調(diào)整和鞏固，維護(hù)市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的健康發(fā)展。

參考文獻(xiàn)

[1]劉櫻.中國(guó)房地產(chǎn)行業(yè)融資問(wèn)題及對(duì)策研究[J].時(shí)代金融，2006（07）.

雙向調(diào)控范文第2篇

據(jù)媒體披露，從4月底開(kāi)始，天津陸續(xù)有濱海新區(qū)差別化限購(gòu)和天津放開(kāi)三套住房限購(gòu)的傳聞傳出。根據(jù)中原地產(chǎn)研究部統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，截至5月20日，已出臺(tái)及傳聞將出臺(tái)救市措施的城市超過(guò)10個(gè)，其中明確出臺(tái)救市措施的城市包括南寧、無(wú)錫、寧波、溫州、徐州等。

盡管已是初夏，但中國(guó)樓市的“倒春寒”卻愈演愈烈。雖然住建部尚未公開(kāi)表態(tài)，但各地政府或明或暗的救市措施，正在從傳言變成事實(shí)，輿論對(duì)此褒貶不一。而在“雙向調(diào)控”的背景下，地方政府或?qū)⑷〈醒胝蔀榻窈蠓康禺a(chǎn)的調(diào)控主體。

房?jī)r(jià)“滯漲”，各地救市

5月下旬，在寧波舉辦的2014年杭州灣論壇上，瑞銀證券中國(guó)證券研究主管侯延琨表示，中國(guó)的房?jī)r(jià)不會(huì)大幅下跌，但他認(rèn)為目前的狀態(tài)非常糟糕。“現(xiàn)在中國(guó)的房地產(chǎn)庫(kù)存和銷(xiāo)售量比已經(jīng)到了2008年以來(lái)最糟糕的階段，”他談道，“最根本的問(wèn)題是新開(kāi)工面積下滑。假如這一數(shù)據(jù)無(wú)法恢復(fù)的話，（受此拖累）明年GDP增速跌破5%是非常有可能的。”

據(jù)國(guó)家統(tǒng)計(jì)局公布的數(shù)據(jù)，今年一季度，房屋新開(kāi)工面積2.9億平方米，同比下降25.2 %。《中國(guó)經(jīng)濟(jì)周刊》記者查閱各地統(tǒng)計(jì)局?jǐn)?shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，一季度廣東此數(shù)據(jù)同比下降35.0%；前4個(gè)月云南同比下降41.0%；而在河南平頂山市，今年1―4月份，商品房開(kāi)工面積同比減少60.9%。

各地新開(kāi)工面積的急劇下滑，顯示出開(kāi)發(fā)商的擔(dān)憂，而房地產(chǎn)行業(yè)的低迷直接體現(xiàn)在房?jī)r(jià)上――5月18日國(guó)家統(tǒng)計(jì)局公布的4月70個(gè)大中城市房?jī)r(jià)指數(shù)顯示，新建商品住宅價(jià)格環(huán)比上漲的城市為44個(gè)，較3月減少12個(gè)，創(chuàng)下2012年11月至今的最低值。從環(huán)比漲幅中位數(shù)看，新建商品住宅價(jià)格環(huán)比漲幅為0.1%，房?jī)r(jià)已經(jīng)進(jìn)入“滯漲”狀態(tài)。

在土地市場(chǎng)，也同樣表現(xiàn)出低迷狀態(tài)。21世紀(jì)不動(dòng)產(chǎn)向《中國(guó)經(jīng)濟(jì)周刊》提供的一份資料顯示，截至5月26日，隨著浦東新場(chǎng)商住用地和寶山羅店商業(yè)用地出讓時(shí)間延后，上海5月經(jīng)營(yíng)性土地市場(chǎng)交易已經(jīng)落下帷幕，整月僅有兩塊經(jīng)營(yíng)性土地出讓?zhuān)瑒?chuàng)2012年3月至今的最低值，合計(jì)出讓面積3.5萬(wàn)平方米、出讓金額32.4億元，環(huán)比分別下滑90.2%和50.9%，同比則分別下滑91.9%和81%。

“5月土地市場(chǎng)遇冷的主要原因在于近期上海土地供應(yīng)收縮，開(kāi)發(fā)商顯得更為謹(jǐn)慎理性。”21世紀(jì)不動(dòng)產(chǎn)上海區(qū)域市場(chǎng)研究部副總監(jiān)黃河滔分析稱(chēng)。

在經(jīng)濟(jì)下行的壓力下，市場(chǎng)傳聞的地方政府救市政策出臺(tái)，不難理解。5月下旬，數(shù)家媒體引述住建部人士非正式表態(tài)稱(chēng)：“除北上廣深之外，其他城市的限購(gòu)政策可以自行調(diào)節(jié)，尤其是庫(kù)存過(guò)大的地方，但不會(huì)明確發(fā)文。”住建部傳達(dá)的調(diào)控方向是，希望市場(chǎng)能自我調(diào)整。但在房產(chǎn)稅、遺產(chǎn)稅等經(jīng)濟(jì)手段沒(méi)有出臺(tái)之前，一些中心城市的部分行政調(diào)控手段不能退出。

至本文截稿時(shí)，住建部尚未對(duì)上述消息做出正式回應(yīng)。“如果上述消息屬實(shí)，意味著非一線城市或?qū)⑷嫠山壪拶?gòu)政策。”黃河滔認(rèn)為，“近期二三線城市紛紛出臺(tái)救市政策，其中不乏或明或暗松綁限購(gòu)政策，如果中央政府不喊停，限購(gòu)政策或?qū)⒎殖恰⒎蛛A段逐級(jí)淡出。”

政府是否該救市？輿論現(xiàn)分歧

面對(duì)樓價(jià)的下跌，各地政府是否應(yīng)該救市？

在2014年杭州灣論壇上，2013年諾獎(jiǎng)得主、耶魯大學(xué)教授羅伯特?席勒（Robert Shiller）給出了肯定的答案。他認(rèn)為“盡管中國(guó)房地產(chǎn)市場(chǎng)目前處于大幅的波動(dòng)，但是這并不代表世界末日，只要政府讓市場(chǎng)盡可能地穩(wěn)定，在合理的干預(yù)下能夠保證市場(chǎng)穩(wěn)定就沒(méi)有問(wèn)題”。

在同一場(chǎng)合與席勒對(duì)話時(shí)，侯延琨認(rèn)為，“各地政府最近出臺(tái)救市措施，是一個(gè)非常合適的時(shí)機(jī)，但政府的刺激是不是能夠有效托底，卻讓人懷疑。”

房地產(chǎn)專(zhuān)家韓世同也認(rèn)為政府此時(shí)該救市，他說(shuō)，如需要救市，應(yīng)該先做基本判斷：現(xiàn)在是否已經(jīng)有房?jī)r(jià)暴跌甚至崩盤(pán)的危險(xiǎn)，從而影響經(jīng)濟(jì)、金融安危？一種答案是肯定的，一種答案是否定的，如果認(rèn)為未來(lái)不可能出現(xiàn)崩盤(pán)、泡沫破碎的危機(jī)，就不需做任何動(dòng)作。“這個(gè)基本判斷中，我傾向于前者，（政府）現(xiàn)在就必然要采取措施。”他對(duì)《中國(guó)經(jīng)濟(jì)周刊》記者說(shuō)。

在接受《中國(guó)經(jīng)濟(jì)周刊》專(zhuān)訪時(shí)，上海財(cái)經(jīng)大學(xué)陳杰教授的觀點(diǎn)卻截然相反。他認(rèn)為地方政府不僅不應(yīng)該救市，而且目前救市的時(shí)機(jī)也完全不當(dāng)。他認(rèn)為目前經(jīng)濟(jì)還沒(méi)有惡化到需要救市的程度，政府應(yīng)該給市場(chǎng)一個(gè)長(zhǎng)期的穩(wěn)定預(yù)期，如果政府都是隨行就市，市場(chǎng)參與者難有長(zhǎng)遠(yuǎn)預(yù)期，經(jīng)濟(jì)就難以穩(wěn)定發(fā)展。

“政府人為地用短期化的手段去調(diào)節(jié)市場(chǎng)，其實(shí)像打激素。政府不應(yīng)當(dāng)改變市場(chǎng)機(jī)制，而應(yīng)該讓市場(chǎng)自我調(diào)整。”陳杰說(shuō)，“應(yīng)該順應(yīng)市場(chǎng)本身的規(guī)律，不管投資者是個(gè)人也好，開(kāi)發(fā)商也好，如果決策失誤，就應(yīng)該受到市場(chǎng)的懲罰。”

“雙向調(diào)控”促地方政府成調(diào)控主體

對(duì)于房地產(chǎn)調(diào)控，政府將如何作為？今年“兩會(huì)”期間，住建部部長(zhǎng)姜偉新在回答記者提問(wèn)時(shí)拋出了“雙向調(diào)控”的理念，這與“分類(lèi)調(diào)控”一起成為今年地產(chǎn)界的熱詞。

此后，住建部副部長(zhǎng)齊驥就“雙向調(diào)控”做出了解釋?zhuān)核^雙向調(diào)控亦可稱(chēng)分類(lèi)指導(dǎo)，即對(duì)一線城市繼續(xù)增加供應(yīng)，抑制投機(jī)性需求，限購(gòu)政策不退出；而對(duì)于庫(kù)存量比較大的城市，要控制供地結(jié)構(gòu)。

此番各地政府的救市之舉似乎正回應(yīng)了上述兩個(gè)熱詞。黃河滔認(rèn)為，在此政策背景下，中央和地方在調(diào)控中所扮演的角色也正在發(fā)生轉(zhuǎn)換。

雙向調(diào)控范文第3篇

【關(guān)鍵詞】電子商務(wù) 經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng) 協(xié)調(diào)發(fā)展 控制模式

一、電子商務(wù)復(fù)雜大系統(tǒng)的特征

（一）復(fù)雜大系統(tǒng)的特征

從現(xiàn)代經(jīng)濟(jì)發(fā)展的大趨勢(shì)來(lái)看，復(fù)雜大系統(tǒng)具有開(kāi)放性、層次性、動(dòng)態(tài)性、復(fù)雜性特征。一般來(lái)說(shuō)，復(fù)雜大系統(tǒng)都是有人、機(jī)、環(huán)境三大要素來(lái)構(gòu)成的，要素之間的溝通需要借助環(huán)境所賦予的各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行，因此社會(huì)經(jīng)濟(jì)系統(tǒng)必須是一個(gè)開(kāi)放性的系統(tǒng)，否則其會(huì)失去生命力。構(gòu)成復(fù)雜大系統(tǒng)的要素通常是許多小系統(tǒng)，這些小系統(tǒng)在獨(dú)立發(fā)揮作用時(shí)是呈現(xiàn)層次性的，這也體現(xiàn)了復(fù)雜大系統(tǒng)的層次性。社會(huì)經(jīng)濟(jì)是不斷發(fā)展變化的，這也使得復(fù)雜大系統(tǒng)的穩(wěn)定狀態(tài)是動(dòng)態(tài)的，社會(huì)經(jīng)濟(jì)因素的變動(dòng)帶動(dòng)系統(tǒng)的變動(dòng)。復(fù)雜性則可分為三個(gè)層次，即物理層的復(fù)雜性、生物層的復(fù)雜性、社會(huì)經(jīng)濟(jì)層的復(fù)雜性。

（二）電子商務(wù)的大系統(tǒng)特征

電子商務(wù)的大系統(tǒng)是社會(huì)經(jīng)濟(jì)復(fù)雜大系統(tǒng)的重要組成部分，可視作是其子系統(tǒng)，因此電子商務(wù)的大系統(tǒng)除具備復(fù)雜大系統(tǒng)的主要特征之外，還具有電子商務(wù)系統(tǒng)的特征。電子商務(wù)的大系統(tǒng)是開(kāi)放狀態(tài)的，它面向的是所有企業(yè)與個(gè)人，在開(kāi)放的環(huán)境中完成物質(zhì)交換與信息交換。系統(tǒng)通常包含若干個(gè)子系統(tǒng)，這是由其商務(wù)活動(dòng)的性質(zhì)決定的，比如企業(yè)投入的資源、各職能部門(mén)等。系統(tǒng)的子系統(tǒng)種類(lèi)繁多且復(fù)雜，由于電子商務(wù)大系統(tǒng)具有開(kāi)放性特征，這使得構(gòu)成或參與電子商務(wù)活動(dòng)的要素很多，每個(gè)要素都可能成為一個(gè)子系統(tǒng)，這造成了子系統(tǒng)的種類(lèi)繁多且具有復(fù)雜性特征。

二、電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)協(xié)調(diào)發(fā)展控制理論與方式

（一）電子商務(wù)協(xié)調(diào)發(fā)展的大系統(tǒng)遞階結(jié)構(gòu)

電子商務(wù)系統(tǒng)是社會(huì)經(jīng)濟(jì)大系統(tǒng)的子系統(tǒng)，因此其可按照大系統(tǒng)的多層遞階結(jié)構(gòu)思想來(lái)建立多層管理模式，即將電子商務(wù)系統(tǒng)按照構(gòu)成要素分成相互獨(dú)立的多個(gè)子系統(tǒng)，每個(gè)子系統(tǒng)相互關(guān)聯(lián)，通過(guò)統(tǒng)計(jì)指標(biāo)分析可建立三層結(jié)構(gòu)的遞階結(jié)構(gòu)系統(tǒng)：局部控制級(jí)（直接控制層，最低決策級(jí)）、遞階控制級(jí)（最優(yōu)化層、中間決策級(jí)）、協(xié)調(diào)控制層（自適應(yīng)層，最高決策級(jí)）。根據(jù)國(guó)民經(jīng)濟(jì)控制原理，這種三層結(jié)構(gòu)的電子商務(wù)遞階結(jié)構(gòu)系統(tǒng)更有利于實(shí)現(xiàn)國(guó)民經(jīng)濟(jì)的協(xié)調(diào)控制，促進(jìn)產(chǎn)業(yè)組織結(jié)構(gòu)的優(yōu)化，改善企業(yè)經(jīng)營(yíng)管理。遞階結(jié)構(gòu)的電子商務(wù)系統(tǒng)體現(xiàn)較強(qiáng)的雙向控制特征，即電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)的雙向控制。

（二）電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)間的協(xié)調(diào)發(fā)展指數(shù)模型

要研究電子商務(wù)對(duì)經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)的協(xié)調(diào)控制評(píng)價(jià)，需要建立電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)的協(xié)調(diào)控制指數(shù)模型，該模型需要滿足兩個(gè)要素，即協(xié)調(diào)度與發(fā)展量。首先，根據(jù)電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)發(fā)展的特征與相互關(guān)聯(lián)，建立電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)的協(xié)調(diào)發(fā)展評(píng)價(jià)指數(shù)，并對(duì)該指數(shù)進(jìn)行無(wú)量綱處理，使該模型能夠?qū)崿F(xiàn)量化分析；其次，據(jù)大系統(tǒng)的協(xié)調(diào)原則，即關(guān)聯(lián)預(yù)估原理，計(jì)算每個(gè)指標(biāo)的狀態(tài)變量指標(biāo)的協(xié)調(diào)變量，并對(duì)無(wú)量綱指標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，并進(jìn)行加權(quán)加法，最終得到協(xié)調(diào)發(fā)展指數(shù)模型：

（三）電子商務(wù)協(xié)調(diào)控制模型

在研究電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)的協(xié)調(diào)控制時(shí)，可將電子商務(wù)視作一個(gè)大系統(tǒng)，將其構(gòu)成要素視為其的子系統(tǒng)，那么從電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)的實(shí)際出發(fā)，通過(guò)分析電子商務(wù)大系統(tǒng)的各個(gè)子系統(tǒng)模型，并在內(nèi)在關(guān)聯(lián)的作用下生成整體的模型結(jié)構(gòu)。即：

從模型的構(gòu)建來(lái)看，其計(jì)算過(guò)程如下：①收集研究對(duì)象的資料，并根據(jù)構(gòu)建模型的需求統(tǒng)計(jì)單個(gè)指標(biāo)；②根據(jù)上述模型計(jì)算時(shí)變參數(shù)θij（k）；③在確定好各項(xiàng)參數(shù)后，結(jié)合實(shí)際情況采取最為合理的方法對(duì)參數(shù)進(jìn)行估計(jì)與預(yù)測(cè)；④采用狀態(tài)方程的自適應(yīng)預(yù)測(cè)與控制；⑤進(jìn)行電子商務(wù)大系統(tǒng)的自適應(yīng)協(xié)調(diào)控制。

三、電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)協(xié)調(diào)發(fā)展及雙向控制

（一）電子商務(wù)―經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)協(xié)調(diào)發(fā)展控制

要想分析電子商務(wù)―經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)協(xié)調(diào)發(fā)展，必須設(shè)計(jì)出電子商務(wù)系統(tǒng)控制指標(biāo)與經(jīng)濟(jì)系統(tǒng)控制的指標(biāo)，然后計(jì)算協(xié)調(diào)度指標(biāo)。電子商務(wù)―經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)協(xié)調(diào)發(fā)展控制指標(biāo)體系主要包括信息資源開(kāi)發(fā)效率指標(biāo)、信息資源投入效率指標(biāo)、信息資源利用效率指標(biāo)、協(xié)調(diào)度指標(biāo)。協(xié)調(diào)度指標(biāo)主要包括管理運(yùn)行協(xié)調(diào)度、企業(yè)文化適宜度。將所有指標(biāo)明確后，經(jīng)過(guò)無(wú)量綱化處理，即可實(shí)現(xiàn)對(duì)電子商務(wù)―經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)協(xié)調(diào)發(fā)展控制的評(píng)價(jià)。

（二）企業(yè)電子商務(wù)協(xié)調(diào)發(fā)展評(píng)價(jià)

企業(yè)電子商務(wù)協(xié)調(diào)發(fā)展評(píng)價(jià)既是將電子商務(wù)大系統(tǒng)所有指標(biāo)進(jìn)行加權(quán)量化，一般采用多級(jí)模糊綜合評(píng)價(jià)方法進(jìn)行。涉及評(píng)價(jià)的指標(biāo)主要包括內(nèi)生信息資源產(chǎn)出率、外生信息資源產(chǎn)出率、電子商務(wù)收益率、電子商務(wù)銷(xiāo)售收益率、信息基礎(chǔ)設(shè)備使用率、電子商務(wù)需求效率、電子商務(wù)應(yīng)用效率、電子商務(wù)利用率、專(zhuān)利成果利用率、電子商務(wù)人員業(yè)績(jī)、電子商務(wù)系統(tǒng)運(yùn)行調(diào)度、企業(yè)文化適宜度、管理運(yùn)行協(xié)調(diào)度等。對(duì)所有指標(biāo)因素進(jìn)行量化加權(quán)后，通過(guò)綜合分析，可實(shí)現(xiàn)電子商務(wù)經(jīng)濟(jì)協(xié)調(diào)發(fā)展評(píng)價(jià)。

（三）電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)的協(xié)調(diào)控制思路

電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)之間的關(guān)聯(lián)程度可直觀的反應(yīng)企業(yè)經(jīng)濟(jì)活動(dòng)水平，電子商務(wù)系統(tǒng)質(zhì)量則決定了電子商務(wù)系統(tǒng)的運(yùn)行效率與經(jīng)濟(jì)效益，因此在進(jìn)行電子商務(wù)與經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)協(xié)調(diào)控制時(shí)，應(yīng)考慮電子商務(wù)系統(tǒng)控制的目標(biāo)，即提高區(qū)域經(jīng)濟(jì)系統(tǒng)的電子商務(wù)資源配置效率，提高經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)層次。

參考文獻(xiàn)

[1]楊哲.電子商務(wù)對(duì)經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)貢獻(xiàn)的評(píng)價(jià)與控制研究[J].商場(chǎng)現(xiàn)代化.2014.10.

雙向調(diào)控范文第4篇

1.1半定量RT-PCR檢測(cè)VEGF的表達(dá)提取RNA方法如下：將50mL細(xì)胞培養(yǎng)瓶中細(xì)胞達(dá)到80%融合時(shí)，倒掉培養(yǎng)液，加入1mLTrizol。將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)Trizol吸取至1mLEP管中，室溫靜置5min。加入200μL氯仿，劇烈搖晃數(shù)次，室溫靜置5min，11000轉(zhuǎn)/分，4℃離心15min。取上清液加入新1mLEP管中，加入500μL異丙醇后搖晃數(shù)次。室溫靜置10min，11000轉(zhuǎn)/分，4℃離心10min。棄上清液加1mL75%乙醇后混勻。7500轉(zhuǎn)/分，4℃離心5min。棄上清液風(fēng)干，加入20μL無(wú)RNA酶水，58℃加溫10min，-70℃凍存。將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，50μL反應(yīng)體系PCR反應(yīng)。VEGF（682bp）引物序列：5''''ggctctagatcgggcctccgaaaccat3''''和5''''ggctctagagcgcagagtctcctcttc3'''';β-actin（434bp）引物序列：5''''tgtgcccatctacgaggggtatgc3''''和5''''ggtacatggtggtgccgccagaca3''''。反應(yīng)條件：95°C變性，30s；VEGF63.5°C退火，27循環(huán)，45s；或β-actin57°C退火，25循環(huán)，30s；72°C延伸30s。收集PCR產(chǎn)物1.5%瓊脂糖電泳。凝膠成像系統(tǒng)半定量分析。以上結(jié)果均重復(fù)3次。

1.2統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量指標(biāo)用（x軃±s）表示，ANOVA方差分析，student-Newman-Keuls檢驗(yàn)，方差齊性檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1細(xì)胞毒性活力檢測(cè)ACC-M和ACC-2細(xì)胞在不同濃度的SNAP作用4h后細(xì)胞的活力，在0μmol/L~500μmol/L濃度的SNAP作用下，細(xì)胞的活力均保持在88%以上（表1）。經(jīng)濃度100ng/mL的LPS預(yù)刺激12h后，用500μmol/L的SNAP分別作用不同時(shí)間ACC-M和ACC-2細(xì)胞活力，其活力均保持在86%以上。

2.2不同濃度SNAP對(duì)ACCs細(xì)胞中VEGF的mRNA表達(dá)水平的影響半定量RT－PCR的結(jié)果表明（圖1、圖2），在31.25μmol/LSNAP刺激下ACC-M和ACC-2細(xì)胞中VEGF的mRNA平均水平顯著升高，為2.32±0.10和2.14±0.15，分別是對(duì)照組細(xì)胞（0μmol/L）mRNA水平的4.14倍和6.90倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（P<0.01）。隨著SNAP刺激濃度升高，mR－NA水平逐漸回落：62.5μmol/LSNAP仍可明顯上調(diào)VEGF的mRNA水平（P<0.01），但不及31.25μmol/L的SNAP顯著；125μmol/L和250μmol/LSNAP對(duì)VEGFmRNA影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而500μmol/LSNAP則顯著下調(diào)ACCs細(xì)胞中VEGF的mRNA水平（P<0.01），僅為基礎(chǔ)mRNA水平的0.23倍和0.17倍（表3）。One－WayANOVA檢驗(yàn)和Student–Newman-Keuls檢驗(yàn)比較31.25μmol/L、62.5μmol/L及500μmol/L濃度組與0對(duì)照組mRNA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3SNAP時(shí)間依賴(lài)性抑制100ng/mLLPS誘導(dǎo)的VEGF的表達(dá)水平隨著500μmol/LSNAP作用時(shí)間的延長(zhǎng)，ACCs細(xì)胞中LPS誘導(dǎo)的VEGFmRNA水平顯著下降（P<0.01）；當(dāng)500μmol/LSNAP作用4h后，僅可檢測(cè)到極微弱的VEGFmRNA條帶，其mRNA的平均表達(dá)水平顯著低于LPS誘導(dǎo)12h后SNAP作用0小時(shí)組的mRNA水平（表4）。半定量RT－PCR的結(jié)果（見(jiàn)圖3、圖4）。One－WayANOVA檢驗(yàn)和Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)比較其他各時(shí)間組與0對(duì)照組mRNA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3討論

一氧化氮（NO）是一種極不穩(wěn)定的生物自由基，其生成依賴(lài)于細(xì)胞內(nèi)的一氧化氮合成酶（nitricoxidesynthaseenzyme，NOS）。它能通過(guò)傳遞電子的反應(yīng)參與機(jī)體的氧化還原反應(yīng)，在生物體內(nèi)發(fā)揮重要生理作用。目前越來(lái)越多的研究證實(shí)，NO在腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮著雙向調(diào)節(jié)的作用。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤微血管內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤基質(zhì)細(xì)胞中NOS的高表達(dá)，能抑制腫瘤的生長(zhǎng)和局部浸潤(rùn)。而另一些研究表明，NO具有促進(jìn)腫瘤血管發(fā)生和局部侵襲性。不同的NO濃度是其在腫瘤調(diào)控中發(fā)揮著截然相反作用的主要原因。高濃度的NO在生物體內(nèi)形成過(guò)氧亞硝基（OONO-）和N3O2，能氧化或硝化DNA導(dǎo)致DNA單鏈斷裂、抑制DNA的合成以及核苷酸還原酶的活性，并能抑制體內(nèi)的磷酸化信號(hào)通路的活化促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。而低濃度的NO被證實(shí)與腫瘤微血管發(fā)生、腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移相關(guān)。因此將NO作為腫瘤治療的重要手段的同時(shí)，應(yīng)充分認(rèn)識(shí)低濃度的NO對(duì)腫瘤促進(jìn)作用。本實(shí)驗(yàn)證明NO的供體SNAP對(duì)ACCs細(xì)胞有著雙向調(diào)控作用，當(dāng)SNAP的刺激濃度在31.25μmol/L時(shí)能顯著上調(diào)血管發(fā)生相關(guān)因子的表達(dá)，而當(dāng)SNAP的刺激濃度在500μmol/L時(shí)血管發(fā)生相關(guān)因子的表達(dá)被有效抑制。

大量研究證明，NO誘導(dǎo)的血管發(fā)生相關(guān)因子的異常表達(dá)，在促進(jìn)腫瘤微血管發(fā)生方面發(fā)揮著重要的作用。Jenkins等[8]首次報(bào)道在人腫瘤細(xì)胞中，轉(zhuǎn)入iNOScDNA閱讀框后腫瘤生長(zhǎng)加速，且伴隨著大量微血管的發(fā)生。Ambs等的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在異種種植瘤內(nèi)NO能誘導(dǎo)VEGF表達(dá)增高，促進(jìn)腫瘤微血管發(fā)生。可見(jiàn)在ACC中，相對(duì)低濃度的NO可能通過(guò)上調(diào)VEGF表達(dá)來(lái)促進(jìn)腫瘤微血管發(fā)生。

雙向調(diào)控范文第5篇

【關(guān)鍵詞】 PTEN 雙向電泳 基質(zhì)輔助激光解 電離飛行時(shí)間質(zhì)譜 肽質(zhì)量指紋圖譜

ABSTRACT: Objective To study protein variation between PtenL/LMEFs and Pten/MEFs cells. Methods Twodimensional electrophoresis (2DE) was employed to compare the differential expression proteins between PtenL/LMEFs and Pten/MEFs cells. Six differential expression proteins were digested in gel by enzyme and the mass of generated peptides was measured by matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDITOFMS). The data obtained from peptide mass fingerprinting (PMF) were searched using the Internet available database and five proteins were identified. Results Compared with that of PtenL/LMEFs， expression level of proteins including phosphoglycerate mutase 1 (PGAM1) and peptidylprolyl cistrans isomerase C (PPIC) was upregulated， whereas expression level of Transgelin 2 was downregulated in Pten/MEFs cells. B and F proteins were both identified to be peroxiredoxin6. They had similar molecular weight but different PI which might be caused by posttranslation modification. B protein was only expressed in Pten/MEFs cells. Conclusion The protein profile of Pten/MEFs cells displayed obvious difference compared to that of PtenL/LMEFs cells. The results implied that various distinct different proteins might lead to cancer.

KEY WORDS: PTEN; twodimensional electrophoresis (2DE); matrix assisted laser desorption/ionization timeofflight mass spectrometry; peptide mass fingerprinting

第10號(hào)染色體同源缺失性磷酸酶張力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten， PTEN)是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的其產(chǎn)物具有磷酸酶活性的抑癌基因，它通過(guò)負(fù)調(diào)控多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑包括PI3K/Akt途徑、FAK途徑和MAPK途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、生存及轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)PTEN在多種腫瘤中存在缺失或突變 [12]。培育PTEN基因敲除小鼠及細(xì)胞系是研究PTEN基因功能的最重要的手段。永生化的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系PtenL/LMEFs細(xì)胞和PTEN基因敲除小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系Pten/MEFs是研究PTEN功能的理想體外細(xì)胞模型。Pten/MEFs細(xì)胞的建系方法：首先培育并永生化來(lái)自PtenloxP/loxP小鼠的胚胎成纖維細(xì)胞(PtenL/LMEFs細(xì)胞)，此小鼠的Pten基因的外顯子5兩旁各插入一段loxP序列，但Pten的轉(zhuǎn)錄不受影響，因此PtenL/LMEFs細(xì)胞可作為Pten表達(dá)正常的對(duì)照細(xì)胞；此細(xì)胞系在體外條件下被瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Cre重組酶，Cre重組酶可識(shí)別并剪切由loxP序列所標(biāo)記的序列，經(jīng)過(guò)篩選而獲得Pten缺失的細(xì)胞系Pten/MEFs[3]。Freeman等[3]利用以上細(xì)胞系研究了PTEN對(duì)p53的作用，提出了PTEN同p53相互作用的新機(jī)制：PTEN可同p53直接物理性結(jié)合，影響p53結(jié)合DNA的能力，調(diào)控p53的轉(zhuǎn)錄活力。Chang等[4]利用以上細(xì)胞系的研究發(fā)現(xiàn)PTEN通過(guò)Mdm2的P1啟動(dòng)子調(diào)節(jié)Mdm2的表達(dá)。Li等[5]利用以上細(xì)胞系的研究發(fā)現(xiàn)一種分泌性的生長(zhǎng)因子Pleiotrophin在PTEN缺失后表達(dá)上調(diào)，抑制該蛋白的表達(dá)后PTEN缺失細(xì)胞的生長(zhǎng)和致瘤能力降低。為了更好地了解PTEN調(diào)控細(xì)胞功能的機(jī)制，本研究應(yīng)用蛋白質(zhì)組技術(shù)比較了PtenL/LMEFs與Pten/MEFs細(xì)胞系的蛋白質(zhì)表達(dá)譜，鑒定出一些差異表達(dá)的蛋白，為闡明PTEN調(diào)控細(xì)胞功能的機(jī)制提供了新的線索。

1 材料與方法

1.1 材料 PtenL/LMEFs細(xì)胞系和Pten/MEFs細(xì)胞系由美國(guó)加州大學(xué)洛杉基分校Hong Wu博士饋贈(zèng)，本實(shí)驗(yàn)室保存；IPG干膠條(pH 3-10，18cm)，蛋白定量試劑盒(2D Quant Kit)購(gòu)自Amersham Pharmacia公司；蛋白酶抑制劑(Protease inhibitor cocktail tablet)購(gòu)自Roche公司；低分子量標(biāo)準(zhǔn)購(gòu)自Promega公司；Trisbase購(gòu)自Sigma公司；PTEN/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Cell Signaling公司(含磷酸化PTEN多克隆抗體、AKT多克隆抗體、磷酸化AKT473多克隆抗體、磷酸化AKT308多克隆抗體、磷酸化GSK3β多克隆抗體，均為兔抗小鼠的多克隆抗體)；山羊抗小鼠PTEN多克隆抗體、熒光顯色試劑購(gòu)自Santa cruz公司，HRP標(biāo)記的兔抗山羊多克隆抗體購(gòu)自中山生物試劑公司；PVDF膜購(gòu)自Biorad公司；等電聚焦儀為EttanTM IPGphorTM(Amersham Pharmacia)；垂直板電泳儀為Protean Ⅱ Xi(BioRad，美國(guó))；質(zhì)譜儀為Reflex Ⅲ MALDITOF MS(Bruker)。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)和蛋白樣品制備 PtenL/LMEFs和Pten/MEFs細(xì)胞按常規(guī)方法培養(yǎng)，用含100mL/L胎牛血清，終濃度為100u/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液，置于37℃、50mL/L CO2培養(yǎng)箱中恒溫恒濕培養(yǎng)；當(dāng)細(xì)胞達(dá)到指數(shù)增長(zhǎng)期后，胰酶消化細(xì)胞并用PBS緩沖液洗滌3遍；1×107個(gè)細(xì)胞中加入100μL的裂解緩沖液(8mol/L尿素，40g/L CHAPS，40mmol/L Trisbase)并加入蛋白酶抑制劑，用超聲儀超聲裂解細(xì)胞；加入10μL RNA酶(10μg/μL)，4℃放置30min，4℃ 12000r/min離心15min去除不溶性沉淀；取上清用蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，按照每管1mg分裝，-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 雙向電泳 參照文獻(xiàn)[7]進(jìn)行。分別在1mg PtenL/LMEFs和Pten/MEFs細(xì)胞蛋白樣品中加入溶漲液(8mol/L尿素，20g/L CHAPS，體積分?jǐn)?shù)為0.5% pH 3-10 IPG緩沖液，20mmol/L DTT和極少量的溴酚藍(lán))定容至350μL，充分混勻。用18cm IPG膠條(pH 3-10)于20℃在IPGphor(Amersham Pharmacia Biotech)上等電聚焦(每個(gè)膠條在30V電壓下聚焦6h，500V電壓下聚焦1h，1000V電壓下聚焦1h，8000V電壓下聚焦5h，每個(gè)膠條電流不超過(guò)50μA)。膠條經(jīng)2次平衡后，在垂直膠電泳系統(tǒng)(BioRad protean Ⅱ Xi， BioRad laboratories)上用125g/L的SDSPAGE進(jìn)行雙向分離。電泳完成后，用考馬斯亮藍(lán)G250染色液過(guò)夜染色，用10mL/L冰乙酸脫色。

1.4 圖像掃描和分析 用ImageScanner掃描儀掃描，用PDQUEST 7.0軟件進(jìn)行圖像分析。

1.5 膠內(nèi)酶切 切取膠上的蛋白質(zhì)點(diǎn)，用50μL脫色液(25mmol/L碳酸氫氨+體積分?jǐn)?shù)為50%乙腈)于室溫脫色至膠塊無(wú)色。真空離心后加入2μL溶于20mmol/L碳酸氫氨的胰蛋白酶(10ng/μL，Roche測(cè)序級(jí))，4℃吸漲1h后37℃作用10-12h。加入8μL體積分?jǐn)?shù)為5%三氟乙酸，37℃溫育1h，將液體吸凈，移至干凈的離心管中。再加入8μL溶液(體積分?jǐn)?shù)為2.5%三氟乙酸+體積分?jǐn)?shù)為50%乙腈)，30℃溫育1h，吸出液體，與前一次的抽提物合并。真空離心干燥肽段提取液，用2μL溶液(體積分?jǐn)?shù)為0.5%三氟乙酸+體積分?jǐn)?shù)為30%乙腈)充分溶解肽段，進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。

1.6 MALDITOF質(zhì)譜鑒定及數(shù)據(jù)庫(kù)檢索 基質(zhì)為溶于體積分?jǐn)?shù)為0.1%三氟乙酸/體積分?jǐn)?shù)為50%乙腈的飽和α氰基4羥基肉桂酸，利用Reflex Ⅲ MALDITOF MS質(zhì)譜儀(Bruker)在加速電壓為20kV，反射電壓為23kV的條件下進(jìn)行MALDITOF MS測(cè)定。質(zhì)譜數(shù)據(jù)利用Bruker的標(biāo)準(zhǔn)肽段或胰蛋白酶自裂解片段進(jìn)行校正。將質(zhì)譜所測(cè)肽質(zhì)量指紋圖譜數(shù)據(jù)輸入互聯(lián)網(wǎng)上的Mascot數(shù)據(jù)庫(kù)(matrixscience.com)進(jìn)行檢索。檢索時(shí)，物種選擇小鼠，可接受的肽段相對(duì)分子質(zhì)量誤差為0.4ku，固定修飾方式(fixed modifications)選擇Carbamidomethyl(C)，可變的氨基酸修飾方式(Variable modifications)選擇Oxidation(M)，Max missed cleavage為1，最少匹配肽段4個(gè)。分值大于54為檢索結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

1.7 Western印跡 提取細(xì)胞總蛋白質(zhì)，取100μg上樣行100g/L聚丙烯酰胺凝膠電泳后轉(zhuǎn)膜。50g/L脫脂奶粉室溫封閉膜2h，一抗4℃孵育過(guò)夜。所用一抗分別是：PTEN多克隆抗體、磷酸化PTEN多克隆抗體、AKT多克隆抗體、磷酸化AKT473(PAKT473)多克隆抗體、磷酸化AKT308(PAKT308)多克隆抗體、磷酸化GSK3β多克隆抗體。用HRP標(biāo)記的第二抗體室溫孵育2h后，發(fā)光底物顯跡法進(jìn)行顯跡，經(jīng)顯影、定影后分析雜交信號(hào)，并以同一張膜上重復(fù)雜交β肌動(dòng)蛋白(ACTIN)作為對(duì)照。

2 結(jié)果

2.1 Western blot檢測(cè)結(jié)果 Western blot檢測(cè)證實(shí)PTEN在PtenL/LMEFs中表達(dá)水平較高且有磷酸化的PTEN(PPTEN)存在而在Pten/MEFs細(xì)胞中檢測(cè)不到PTEN和PPTEN蛋白(圖1)，表明細(xì)胞系PtenL/LMEFs正常表達(dá)PTEN蛋白，而Pten/MEFs細(xì)胞PTEN蛋白表達(dá)缺失。PTEN/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵分子的蛋白表達(dá)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：PTEN缺失后細(xì)胞內(nèi)AKT在473位和308位的磷酸化水平均顯著增加，GSK3β磷酸化水平增加(圖2)。

圖1 Western blot 檢測(cè)PtenL/LMEFs和Pten/MEFs細(xì)胞中PTEN和PPTEN蛋白的表達(dá)（略）

Fig.1 Expression of PTEN and PPTEN in PtenL/LMEFs and Pten/ MEFs cells

2.2 PtenL/LMEFs和Pten/MEFs細(xì)胞的蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜分析 PtenL/LMEFs和Pten/MEFs細(xì)胞總蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳重復(fù)3次，代表性圖譜如圖3和圖4所示。用PDQUEST 8.0.1軟件分析蛋白圖譜。每張電泳圖顯示約900個(gè)蛋白點(diǎn)。對(duì)差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)A、B、C、D、E和F(圖3、圖4)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。

圖2 Western blot 檢測(cè)PtenL/LMEFs和Pten/MEFs細(xì)胞中PTEN/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)（略）

Fig.2 Expression of key moleculors of PTEN/AKT signal transduction pathway in PtenL/LMEFs and Pten/MEFs cells

2.3 雙向凝膠差異蛋白點(diǎn)的肽質(zhì)量指紋譜鑒定 對(duì)差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)A、B、C、D、E和F進(jìn)行MALDITOFMS測(cè)定肽質(zhì)量指紋譜。通過(guò)Mascot搜尋軟件直接上網(wǎng)(matrixscience.com)進(jìn)行搜尋，查詢(xún)結(jié)果見(jiàn)表1。除D蛋白由于檢測(cè)分值(protein score)小于54，其余的蛋白檢測(cè)結(jié)果都有意義。

圖3 PtenL/LMEFs(A)和Pten/MEFs(B)細(xì)胞的2DE雙向凝膠圖譜（略）

Fig.3 Twodimensional electrophoretic (2DE) maps of PtenL/LMEFs(A) and Pten/ MEFs(B) cells

圖4 PtenL/LMEFs和Pten/MEFs細(xì)胞的雙向電泳凝膠的局部圖，箭頭所指的蛋白在兩個(gè)細(xì)胞中差異表達(dá)（略）

Fig.4 Segments of twodimensional gels of PtenL/LMEFs and Pten/MEFs cells. Arrowed are six protein spots that are differentially expressed

表1 PtenL/LMEFs和Pten/MEFs細(xì)胞中6個(gè)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，通過(guò)在SWISSPROT 數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索肽質(zhì)量指紋圖譜數(shù)據(jù)，5個(gè)蛋白得到鑒定（略）

Table 1 Six differentially expressed proteins in PtenL/LMEFs and Pten/MEFs cells were analyzed with MALDITOF MS and five proteins were identified by PMF searching in SWISSPROT database

*Protein score is -10×Log(P)， where P is the probability that the observed match is a random event; Protein scores greater than 54 are significant (P

3 討論

PTEN蛋白是雙重底物特異性磷酸酶，具有脂磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性。PTEN蛋白主要通過(guò)它的脂質(zhì)磷酸酶活性對(duì)PI3K途徑起著負(fù)調(diào)控的作用。PTEN缺失導(dǎo)致3，4，5，三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3)水平上升，PIP3的聚集引起各種蛋白激酶的活化，包括PDK1和PKB/AKT絲/蘇氨酸激酶。AKT是PTEN調(diào)控途徑中的關(guān)鍵分子，AKT的絲氨酸-473和蘇氨酸-308位點(diǎn)磷酸化后使AKT激活，參與細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄、翻譯，抵抗凋亡。PI3K/AKT是重要的信號(hào)通路，AKT能夠通過(guò)磷酸化它的底物從而導(dǎo)致細(xì)胞周期進(jìn)程的加速、促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、存活、遷移、血管生成、蛋白合成和糖原代謝等[6]。PTEN蛋白是脂質(zhì)磷酸酶，能使PIP3脫磷酸，阻斷PI3K/AKT通路。如果PTEN蛋白失活，PI3K/AKT持續(xù)活化，將導(dǎo)致細(xì)胞分裂、體積增大、凋亡阻滯和腫瘤血管生成等[7]。本研究發(fā)現(xiàn)PTEN缺失細(xì)胞Pten/MEFs中AKT蛋白在其473位和308位的磷酸化水平明顯升高，說(shuō)明PTEN的缺失導(dǎo)致AKT的激活(圖1、圖2)。GSK3β是AKT調(diào)控的重要底物之一。研究發(fā)現(xiàn)GSK3β的磷酸化水平在PTEN缺失后水平升高(圖2)。GSK3β被AKT磷酸化后，其活性受到抑制，將導(dǎo)致Cyclin D1上GSK3β作用位點(diǎn)的磷酸化程度降低，進(jìn)而阻滯Cyclin D1的蛋白降解，促進(jìn)細(xì)胞增殖[8]。

本研究應(yīng)用蛋白質(zhì)組技術(shù)比較了PtenL/LMEFs與Pten/MEFs細(xì)胞系的蛋白質(zhì)表達(dá)譜，PtenL/LMEFs與Pten/MEFs細(xì)胞系的電泳圖各顯示約900個(gè)蛋白點(diǎn)(圖3)。質(zhì)譜鑒定了差異表達(dá)的蛋白中的6個(gè)蛋白，經(jīng)數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索5個(gè)蛋白點(diǎn)得到確認(rèn)，它們分別是磷酸甘油酸變位酶1(phosphoglycerate mutase 1， PGAM1)、肽脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶C(peptidylprolyl cistrans isomerase C， cyclophilin C)、Transgelin 2和過(guò)氧化物氧化還原酶6(Peroxiredoxin6)蛋白，其中蛋白點(diǎn)B和F經(jīng)檢索得知它們都是過(guò)氧化物氧化還原酶6(表1)。

小鼠的肽脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶C 即Cyclophilin C屬于Cyclophilin家族。Cyclophilin (CyP)即環(huán)孢素A結(jié)合蛋白，是環(huán)孢素A(CyclosporinA，CsA)的細(xì)胞內(nèi)蛋白受體。Mi等[9]發(fā)現(xiàn)Osteopontin的COOH(-)末端片段與另一細(xì)胞轉(zhuǎn)移功能的標(biāo)志蛋白Cyclophilin C作用并結(jié)合到CD147細(xì)胞表面糖蛋白上，從而激活A(yù)KT1/2和基質(zhì)金屬蛋白酶2。體外分析實(shí)驗(yàn)中，在Cyclophilin C存在時(shí)Osteopontin的COOH(-)末端片段促進(jìn)4T07和4T1細(xì)胞的遷移和浸潤(rùn)。Nabeshima等[10]報(bào)道Cyclophilin(A，B，C，D)的過(guò)表達(dá)及其與CD147蛋白的相互作用與胰腺癌、乳腺癌及非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移能力的增強(qiáng)有關(guān)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Cyclophilin C在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著重要的作用。Cyclophilin C在Pten/MEFs細(xì)胞表達(dá)上調(diào)，它在PTEN缺失后的細(xì)胞中的功能還有待進(jìn)一步的研究。

小鼠Transgelin 2與SM22β基因都編碼同一個(gè)199個(gè)氨基酸的蛋白，分子質(zhì)量約為22.4ku，小鼠SM22β與小鼠SM22α蛋白的氨基酸序列有68%的同源性。在平滑肌細(xì)胞中小鼠SM22β與小鼠SM22α蛋白共定位于actin肌絲蛋白上[11]。含有突變的SM22α基因的小鼠其含有平滑肌細(xì)胞的組織及動(dòng)脈、靜脈的組織學(xué)或超微結(jié)構(gòu)沒(méi)有明顯的改變，說(shuō)明在平滑肌細(xì)胞中可能存在與SM22α一起表達(dá)的其他蛋白可能能夠代替其基本的功能，SM22β可能就是該類(lèi)蛋白[1112]。Gabr等報(bào)道大鼠氣管內(nèi)滴入肝素后24h將引起DJ1/PARK7蛋白的顯著上調(diào)和Transgelin 2(TAGLN2)顯著下調(diào)。DJ1/PARK7蛋白是PTEN蛋白的負(fù)調(diào)控蛋白，也是腫瘤潛在的標(biāo)志物[13]。這提示PTEN的抑制與Transgelin 2(TAGLN2)的下調(diào)可能有關(guān)。Transgelin 2在Pten/MEFs細(xì)胞表達(dá)下調(diào)，Transgelin 2同PTEN的關(guān)系及其在腫瘤發(fā)生中的作用值得深入研究。

PGAM1是一種參與糖酵解的酶，可能在腫瘤細(xì)胞的代謝和增殖中起作用。最近的研究表明，腫瘤細(xì)胞的生存有賴(lài)于糖酵解途徑，PGAM1 可作為潛在的腫瘤治療的新靶點(diǎn) [14]。Chen等[15]報(bào)道PGAM1在肺腺癌組織中高表達(dá)且與不良預(yù)后有關(guān)。PGAM1在Pten/MEFs細(xì)胞表達(dá)上調(diào)，它在PTEN缺失后細(xì)胞的代謝和增殖中的作用值得進(jìn)一步研究。

Peroxiredoxin6蛋白是一種抗氧化蛋白，起細(xì)胞保護(hù)作用。在Pten/MEFs細(xì)胞中表達(dá)的兩個(gè)蛋白點(diǎn)B和F經(jīng)質(zhì)譜鑒定和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索發(fā)現(xiàn)它們都是Peroxiredoxin6蛋白，B點(diǎn)在PtenL/LMEFs細(xì)胞中檢測(cè)不到(圖3、圖4)，提示Peroxiredoxin6蛋白在Pten/MEFs細(xì)胞中可能發(fā)生了翻譯后修飾，其意義值得研究。

通過(guò)比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究，我們發(fā)現(xiàn)PTEN缺失的小鼠胚胎細(xì)胞系Pten/MEFs細(xì)胞與PTEN表達(dá)正常的對(duì)照小鼠胚胎細(xì)胞系PtenL/LMEFs細(xì)胞在蛋白表達(dá)水平上存在明顯差異。已經(jīng)鑒定的差異性蛋白質(zhì)涉及細(xì)胞的代謝、氧化應(yīng)激、侵襲轉(zhuǎn)移、信號(hào)傳導(dǎo)等細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程。進(jìn)一步研究它們?cè)赑TEN缺失后細(xì)胞癌變過(guò)程中的作用，這對(duì)深入闡明腫瘤發(fā)生機(jī)理及尋求抗腫瘤新靶點(diǎn)具有重要意義。

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