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凝膠色譜范文第1篇

關(guān)鍵詞 ：食品； 氯丙醇； 在線凝膠滲透色譜氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜； 固相支持液液萃取凈化； 非衍生化

1 引 言

氯丙醇類化合物（包括3MCPD， 2MCPD， 1，3DCP和2，3DCP）早期在于酸水解植物蛋白液及以其為原料的調(diào)味品（如醬油等）中發(fā)現(xiàn)[1～3]，之后又陸續(xù)在面包、香腸、咖啡、谷物類等食品中檢出[4～8]。

毒理學(xué)研究表明，3MCPD可以通過(guò)血睪屏障和血腦屏障，并在體液中廣泛分布，具有生殖、腎臟和神經(jīng)毒性[9，10]。WHO/FAO食品添加劑和污染物聯(lián)合專家委員會(huì)（JECFA）確定1，3DCP具有體外遺傳毒性和生殖毒性，會(huì)引起大鼠肝、腎臟、甲狀腺等的癌變[11]；2，3DCP會(huì)對(duì)肝、腎臟及產(chǎn)生影響[11]。

目前，食品中氯丙醇的檢測(cè)通常采用七氟丁酰咪唑（HFBI）、七氟丁酰酐（HFBA）[12]、三氟乙酸酐（TFAA）[13]和苯硼酸[1]等衍生試劑將氯丙醇衍生，利用氣相色譜質(zhì)譜（GCMS或GCMS/MS）法進(jìn)行測(cè)定[14～18]。我國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 5009.1912006《食品中氯丙醇含量的測(cè)定》中氯丙醇的測(cè)定采用的是以HFBI衍生化的GCMS方法[19]。在上述方法中，衍生化步驟繁冗復(fù)雜；衍生物穩(wěn)定性較差，需衍生后盡快完成測(cè)定；衍生試劑昂貴，增加樣品檢測(cè)成本，并且對(duì)環(huán)境濕度要求極高，否則易吸潮變質(zhì)。

Online GPCGCMS是將凝膠滲透色譜和GCMS在線聯(lián)用的分析檢測(cè)技術(shù)，能將樣品凈化液中分子量較大的脂類、色素等干擾物質(zhì)與目標(biāo)物分離，減少基質(zhì)影響，降低分析背景，提高重現(xiàn)性，實(shí)現(xiàn)連續(xù)自動(dòng)的部分前處理和儀器測(cè)定的在線分析，加快分析速度和提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。與GCMS相比，GCMS/MS將離子碎片施予適當(dāng)能量再次打碎，形成二級(jí)離子碎片，增強(qiáng)了結(jié)構(gòu)解析和定性能力，更有效地排除基質(zhì)干擾。本研究建立了非衍生化的Online GPCGCMS/MS法直接測(cè)定食品中氯丙醇的檢測(cè)方法，同時(shí)對(duì)食品樣品的前處理方法進(jìn)行了優(yōu)化。本方法對(duì)樣品的適用性廣泛，不僅適用于調(diào)味品，也適用于面包、糕點(diǎn)等其它食品樣品。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器、試劑與材料

Online GPCGCMS/MS系統(tǒng)（日本Shimadzu公司），GPC系統(tǒng)包括SIL20ADvp自動(dòng)進(jìn)樣器、ShodexEV200AC凝膠滲透色譜柱（150 mm × 2 mm）、CTO20ASvp柱溫箱、SPD20Avp紫外檢測(cè)器；GCMS/MS系統(tǒng)包括QP2010Plus氣相色譜儀、TQ8040型質(zhì)譜聯(lián)用儀，并配有PTV2010大體積進(jìn)樣器；MilliQ超純水器（美國(guó)Millipore公司）；G560E型渦旋混合器（美國(guó)Scientific Industries公司）；NEVAPTM111型吹氮濃縮儀（美國(guó)Organomation Associates公司）；G560E渦旋混合器（美國(guó)Scientific Industries公司）；AL204分析天平（瑞士梅特勒公司）；NDO400型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司）；微量移液器（德國(guó)Eppendorf公司）。

3MCPD（純度98%，德國(guó)Aldrich公司）；五氘代3氯1，2丙二醇（D53MCPD，純度≥99%，德國(guó)DrEhrenstorfer公司）；1，3DCP、2，3DCP、五氘代1，3二氯2丙醇（D51，3DCP）和五氘代2，3二氯1丙醇（D52，3DCP）（純度≥97%，德國(guó)Fluka公司）；2MCPD、五氘代2氯1，3丙二醇（D52MCPD）（純度≥98%，加拿大TRC公司）；正己烷、乙酸乙酯（色譜純，美國(guó)J.T. Baker公司）；無(wú)水Na2SO4（優(yōu)級(jí)純，天津市津科精細(xì)化工研究所，使用前經(jīng)195℃烘烤8 h使用）；ExtrelutTM NT硅藻土填料（德國(guó)Merck公司）。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱取各氯丙醇和氘代氯丙醇標(biāo)準(zhǔn)品10 mg（精確至0.01 mg），用乙酸乙酯溶解并定容至不同的10 mL棕色容量瓶中，配制成1000 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于20℃貯存。準(zhǔn)確吸取各氯丙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液， 用正己烷逐級(jí)稀釋，配制成10 mg/L氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。準(zhǔn)確吸取各氘代氯丙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用正己烷稀釋，配制成10 mg/L氘代氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。分別準(zhǔn)確吸取適量氯丙醇標(biāo)準(zhǔn)使用液和適量氘代氯丙醇標(biāo)準(zhǔn)使用液， 用正己烷稀釋，配制成0.01， 0.02， 0.05， 0.1， 0.2， 0.5和1.0 mg/L的氯丙醇系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，其中氘代氯丙醇的含量均為0.2 mg/L。

2.3 實(shí)驗(yàn)方法

2.3.1 樣品提取與凈化 準(zhǔn)確稱取2 g試樣于10 mL離心管中（若為固體或半固體試樣，則加入2 mL水，溶解后混勻），加入10 mg/L氘代氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)使用液20 μL，渦旋30 s，加入到填充了2 g ExtrelutTM NT硅藻土填料的塑料層析柱（180 mm × 150 mm）中，靜置10 min，用3 mL正己烷淋洗，棄去流出液，以10 mL乙酸乙酯進(jìn)行固相支持液液萃取，收集流出液至裝有3 g無(wú)水Na2SO4的離心管中，充分吸收水分，轉(zhuǎn)移上清液并于30℃以氮?dú)獯抵两桑谜和槎ㄈ葜? mL，渦旋混勻，無(wú)水Na2SO4除水，待測(cè)。

2.3.2 Online GPCGCMS/MS條件 Online GPC條件：泵流速0.1 mL/min；柱溫40℃；載氣吹掃0.1 min； 流動(dòng)相為丙酮環(huán)己烷（3∶7， V/V）。

氣相色譜質(zhì)譜條件： 氣相色譜柱系統(tǒng)包括空柱（惰性石英管，5 m × 0.53 mm）、預(yù)柱（DB5MS石英毛細(xì)管柱，5 m × 0.25 mm × 0.25 μm）和分析柱（DB5MS石英毛細(xì)管柱，30 m × 0.25 mm × 0.25 μm）。進(jìn)樣體積：10 μL，不分流進(jìn)樣。進(jìn)樣口程序升溫：120℃保持5 min，以100℃/min升至280℃，并恒溫15.9 min。進(jìn)樣時(shí)間：7 min；柱溫箱程序升溫：82℃保持5 min，以8℃/min升至150℃，繼續(xù)以25℃/min升至250℃，并保持5 min。載氣：高純氦氣（純度99.999%），流速為1.75 mL/min。離子源：電子轟擊源，溫度為200℃。溶劑延遲時(shí)間為10 min。采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）掃描，主要質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

3 結(jié)果與討論

3.1 Online GPC收集時(shí)間考察

Online GPCGCMS/MS的原理是樣品經(jīng)Online GPC柱分離，廢液通過(guò)六通閥排出，含有目標(biāo)物的餾分先被儲(chǔ)存在定量補(bǔ)集環(huán)路（200 μL）中，再全部注入GC，通過(guò)溶劑蒸汽出口排出溶劑，同時(shí)目標(biāo)分析物保存在預(yù)柱中。待溶劑排出口關(guān)閉后柱，柱溫箱開(kāi)始升溫，目標(biāo)物進(jìn)入分析柱分離，因此收集時(shí)間的選擇顯得尤為重要。配制0.5 mg/L氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，獲得目標(biāo)物在GPC上保留時(shí)間為3.99～ 4.05 min，考慮到靈敏度和基質(zhì)去除效果，確定收集時(shí)間為3.80～4.25 min。氯丙醇及其內(nèi)標(biāo)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.2 mg/L）的MRM質(zhì)譜圖見(jiàn)圖1， 各氯丙醇的色譜圖見(jiàn)圖2和圖3。

3.2 樣品凈化方法的優(yōu)化

文獻(xiàn) [20，21]利用ExtrelutTM NT硅藻土進(jìn)行固相支持液液萃取凈化，測(cè)定食用植物油中的氯丙醇，使提取液先吸附于硅藻土表面，經(jīng)正己烷淋洗去除脂肪和色素后，以乙酸乙酯與吸附于硅藻土表面的氯丙醇進(jìn)行液液萃取。本實(shí)驗(yàn)對(duì)乙酸乙酯溶劑（純度≥99%）的用量（2， 4， 6， 8， 10和12 mL）進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果見(jiàn)圖4，當(dāng)乙酸乙酯用量為10 mL時(shí)，各氯丙醇的峰面積響應(yīng)值最高。因此，乙酸乙酯用量選擇10 mL。

考慮到Online GPC的在線凈化能力以及簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作，比較了不經(jīng)填料吸附直接進(jìn)行液液萃取凈化的傳統(tǒng)方法與以ExtrelutTM NT硅藻土進(jìn)行的固相支持液液萃取凈化方法的效果，以空白醬油樣品添加回收實(shí)驗(yàn)的方式（0.2 mg/L）測(cè)得4種氯丙醇的回收率分別為53.2%～81.2%和83.3%～110.1%。結(jié)果表明，以ExtrelutTM NT硅藻土進(jìn)行的固相支持液液萃取凈化的效果更好、準(zhǔn)確度更高。

3.3 方法學(xué)驗(yàn)證

3.3.1 線性范圍、檢出限和定量限 以氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)使用液及氯丙醇內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液配制濃度分別為0.005， 0.01， 0.02， 0.05， 0.1， 0.2， 0.5和1.0 mg/L（內(nèi)標(biāo)濃度均為0.2 mg/L）的氯丙醇系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，經(jīng)Online GPCGCMS/MS測(cè)定。以氯丙醇的色譜峰峰面積與其對(duì)應(yīng)的內(nèi)標(biāo)的色譜峰峰面積之比（y）為縱坐標(biāo)，氯丙醇與其對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)的濃度之比（x）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，結(jié)果見(jiàn)表2。4種氯丙醇在0.005～1.0 mg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（R）均大于0.999。

在空白醬油樣品中添加0.001， 0.002， 0.005和0.010 mg/L 4個(gè)水平的3MCPD， 2MCPD， 1，3DCP和2，3DCP標(biāo)準(zhǔn)樣品。以3倍信噪比（S/N=3）所對(duì)應(yīng)的含量作為方法的檢出限（LOD），以10倍信噪比（S/N=10）所對(duì)應(yīng)的含量作為方法的定量限（LOQ），得到氯丙醇類化合物的檢出限在0.002～0.005 mg/kg之間， 定量限在0.005～0.01 mg/kg之間，結(jié)果見(jiàn)表2。與文獻(xiàn)[19]報(bào)道的衍生化方法相比，本方法的檢出限更低（表3）。

3.3.2準(zhǔn)確度與精密度 以空白醬油加標(biāo)回收率表示方法的準(zhǔn)確度，以回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示方法的精密度。在空白醬油樣品中添加0.02， 0.1和0.5 mg/L的3MCPD， 2MCPD， 1，3DCP， 2，3DCP標(biāo)準(zhǔn)樣品，每個(gè)加標(biāo)水平平行測(cè)定6份，結(jié)果見(jiàn)表4。4種氯丙醇的3個(gè)水平加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為94.8%～106.3%（2.2%～10.3%）， 91.8%～108.8%（2.1%～10.6%）和83.1%～109.4%（1.3%～9.4%）。結(jié)果表明，方法的精密度和準(zhǔn)確度良好。

3.4 實(shí)際樣品分析

利用本方法對(duì)于北京地區(qū)超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)及相關(guān)食品企業(yè)采集的78份食品樣品（其中包括醬油20份、料酒16份、面包糕點(diǎn)21份、雞精15份、水解植物蛋白液3份、水解植物蛋白粉3份）進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表5。在檢測(cè)的78份樣品中，3MCPD的檢出率最高，為100%（78/78），2MCPD的檢出率為67.9%（53/78），1，3DCP和2，3DCP的檢出率相對(duì)較低。依據(jù)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB27622012《食品中污染物限量》[22]對(duì)液態(tài)調(diào)味品和固態(tài)調(diào)味品中3MCPD的限量標(biāo)準(zhǔn)（0.4和1.0 mg/kg），醬油、水解植物蛋白液、水解植物蛋白粉、料酒、雞精樣品超標(biāo)率依次為4/20， 2/3， 1/3， 2/16， 0/15。由樣品檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)，某些食品中氯丙醇污染水平仍然較高，因此有必要對(duì)食品中氯丙醇污染進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并采取相應(yīng)的監(jiān)督管理措施。

4 結(jié) 論

結(jié)合固相支持液液萃取凈化樣品前處理技術(shù)，建立了無(wú)需衍生化反應(yīng)的Online GPCGCMS/MS同時(shí)測(cè)定食品中氯丙醇的方法。通過(guò)線性實(shí)驗(yàn)、空白加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)等方法學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了方法的準(zhǔn)確性。與傳統(tǒng)的GCMS衍生化方法相比，本方法簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)，適于食品中氯丙醇的檢測(cè)。實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果表明，不同食品中仍存在氯丙醇污染超過(guò)我國(guó)相關(guān)限量標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)象，因此有必要加強(qiáng)監(jiān)測(cè)及相應(yīng)的監(jiān)督管理措施。

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凝膠色譜范文第2篇

【關(guān)鍵詞】  高效凝膠色譜法； 多花黃精多糖； 分子量及其分布

多花黃精多糖是從傳統(tǒng)中藥百合科植物多花黃精中發(fā)現(xiàn)并分離出一種低分子量活性多糖，為新藥(中藥)原二類,全國(guó)第一個(gè)治療病毒性角膜炎的中藥。多花黃精多糖抗單純皰疹病毒i型的體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明,多花黃精多糖有明顯的抗單純皰疹病毒i型的作用。多糖為單糖的天然聚合物，多糖的性質(zhì)和藥理作用與其分子量大小，分子量分布及其結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。多糖的分子量不是均一的，具多分散性，需要用統(tǒng)計(jì)方法表征其平均分子量及其分子量分布。高效凝膠色譜法測(cè)定多糖的分子量及其分布，具有快速，重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，在國(guó)內(nèi)外得到了廣泛的應(yīng)用[1]。多花黃精多糖為水溶性多糖，針對(duì)其單糖組成和空間結(jié)構(gòu)與葡聚糖相似，在色譜柱的選擇上傾向于更適合于水溶性多糖分離測(cè)定用的shodex ohpak sb803hq系列（對(duì)葡聚糖的排阻極限為1×105）。有關(guān)多花黃精多糖的平均分子量及其分子量分布尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，本文應(yīng)用凝膠滲透色譜（gpc）法測(cè)定多花黃精多糖的平均分子量及其分子量分布[2]，為考察生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定一致性及控制產(chǎn)品質(zhì)量提供了科學(xué)依據(jù)，為多花黃精多糖分子大小和藥理作用的相關(guān)性研究打下了一定基礎(chǔ)。

    1實(shí)驗(yàn)部分

    1.1儀器與試藥

    agilent 1100型高效液相色譜儀（自動(dòng)進(jìn)樣器），示差折光檢測(cè)器。shodex ohpak sb803hq凝膠色譜柱。北京龍智達(dá)公司提供gpc專用軟件。

    供分子量測(cè)定用右旋糖酐分子量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，d0、d1、d2、d3、d5、d6、d8、d2000分子量依次為180、2500、4600、7100、21400、41100、133800、2000000）；其余試劑均為分析純；高純水用milliporeq超純水系統(tǒng)制得。

    試驗(yàn)用樣品多花黃精多糖由四川泰華堂制藥有限公司提供。

    1.2方法與結(jié)果

    1.2.1色譜條件色譜柱為shodex ohpak sb803hq，流動(dòng)相為0.71%硫酸鈉溶液（內(nèi)含0.02%疊氮鈉），柱溫：35 ℃，示差折光檢測(cè)器（檢測(cè)器溫度35 ℃），流速0.5 ml·min－1，取供試品溶液及對(duì)照品溶液各20μl注入液相色譜儀。

    1.2.2溶液的制備取多花黃精多糖適量，加流動(dòng)相制成每1 ml中約含10 mg的溶液，振搖，室溫放置過(guò)夜，作為供試品溶液。另取d0，d2000及4～6個(gè)已知分子量的葡聚糖對(duì)照品，同法制成每1ml中各含10 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。

    1.2.2.5系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)取葡萄糖對(duì)照品溶液（d0），按1.2.1的色譜條件進(jìn)樣，紀(jì)錄色譜圖，按葡萄糖峰計(jì)算理論塔板數(shù)n=5.54×trw1/2=16083；另取d2000對(duì)照品溶液，1.2.1的色譜條件進(jìn)樣，紀(jì)錄色譜圖，計(jì)算分配系數(shù)，kd=trt0ttt0=0.52，kd在0～1之間，符合中國(guó)藥典2005年版的要求。式中tr為供試品峰保留時(shí)間，t0為藍(lán)色葡聚糖（d2000）峰保留時(shí)間，tt為葡萄糖（d0）峰保留時(shí)間。

    1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及樣品測(cè)定

    取上述右旋糖酐系列對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣，記錄洗脫峰的保留時(shí)間，由gpc專用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)分子量的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，以相應(yīng)色譜峰的保留時(shí)間為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。該方法的標(biāo)準(zhǔn)校正曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)0.9997。根據(jù)gpc專用軟件繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線及供試品的保留時(shí)間采用gpc專用軟件計(jì)算樣品各組分的重均分子量及其分子量分布。 表1  右旋糖酐分子量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品保留時(shí)間及其相應(yīng)的對(duì)數(shù)值

1.2.4  精密度試驗(yàn)取供試品溶液20 μl，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)測(cè)定5次，根據(jù)gpc曲線計(jì)算重均分子量（mw）分別為5018，5009，5009，5028，5017，rsd為0.16%，表明該系統(tǒng)測(cè)定樣品分子量的精密度良好。

    1.2.5重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為060701的樣品，按“1.2.2”項(xiàng)下方法分別制備供試品溶液5份，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定分子量及其分子量分布，根據(jù)gpc曲線計(jì)算重均分子量（mw）分別為5020，5028，5044，5054，5053，rsd為0.30%。表明該分析方法測(cè)定樣品分子量精密度良好。

    1.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件，在0h、2h、4h、8h、12h和24h分別進(jìn)樣，測(cè)定分子量及分子量分布，根據(jù)gpc曲線計(jì)算重均分子量（mw）分別為5055，5090，5100，5126，5160、5046，rsd為0.84%。表明供試品溶液在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

    1.2.7樣品的測(cè)定取不同批號(hào)的多花黃精多糖樣品，按“1.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，然后按“1.2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定分子量及分子量分布，結(jié)果見(jiàn)表2。表2  3 批樣品重均分子量及其分布情況表

2討論

  根據(jù)以上測(cè)定結(jié)果可見(jiàn)，測(cè)定的三批多花黃精多糖的重均分子量分布在2500～7500之間，分布寬度小于2.0。用本方法測(cè)定多花黃精多糖的分子量與分子量分布，準(zhǔn)確可行，簡(jiǎn)便快捷，精密度好。

    分布寬度的引入，使多花黃精多糖的分子量分布更具可控性，能夠通過(guò)檢測(cè)該指標(biāo)反映生產(chǎn)該樣品的工藝的變化以及樣品質(zhì)量的變化，使得樣品的質(zhì)量更具有可控性。

凝膠色譜范文第3篇

【關(guān)鍵詞】 寧心膠囊;薄層色譜法;丹參酮ⅡA;黃芪甲苷;苦參堿

Abstract：Objective To establish the qualitative identification methods of Ninxin Capsules. Methods TLC method was used to identify salvia miltiorrhiza， membranous milk vetch root， radix sophorae flavescentis， with chemical substance and medicinal materials as reference. Results The spots for TLC identification of sample， preparation of chemical reference (Tanshinone IIA， astragaloside， matrine) and medicinal materials (salvia miltiorrhiza， membranous milk vetch root， radix sophorae flavescentis) were in the same position with the same color. Conclusion The method is reproducible and feasible， and provides basis for the qualitative quality standard of Ninxin Capsules.

Key words：Ninxin Capsules;TLC;Tanshinone IIA;astragaloside;matrine

寧心膠囊為本院制劑，由丹參、黃芪、苦參等藥物組成，具有寧心安神、益氣養(yǎng)心、活血通脈功效和抗心律失常作用，對(duì)胸痛、心悸也有良好的治療效果。本試驗(yàn)采用薄層色譜法，對(duì)寧心膠囊樣品中的主要組成藥物丹參、黃芪、苦參等進(jìn)行定性鑒別，為本品的質(zhì)量控制提供依據(jù)。現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

PBQ-1型自動(dòng)鋪板器(重慶南岸動(dòng)力儀器廠)，恒溫水浴鍋(常州國(guó)華電器有限公司)，紫外透射反射儀(北京六一儀器廠)，KQ-500超聲波清洗器(上海超聲波儀器廠)等。

寧心膠囊(本院制劑室自制，批號(hào)080613、081025、090301);對(duì)照藥材丹參、黃芪、苦參(購(gòu)自江蘇南通鑫鑫醫(yī)藥藥材有限公司，經(jīng)本院陳峰生主任中藥師鑒定);對(duì)照品丹參酮ⅡA(批號(hào)110766-200416)、黃芪甲苷(批號(hào)781-9002)、苦參堿(批號(hào)100078-200414)，供含量測(cè)定用，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。硅膠G(青島海洋化工有限公司產(chǎn)品)。所用化學(xué)試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參的鑒別

取丹參酮ⅡA對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品內(nèi)容物粉末2 g，加乙醚10 mL，置具塞試管中，超聲提取30 min，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。取丹參藥材1 g，按上述供試品溶液的制備方法制成對(duì)照藥材溶液。按處方量，取除丹參外的其余藥味按工藝要求制成缺丹參的樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性供試品溶液。吸取上述溶液各5 ?L，分別點(diǎn)于以同一羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗(yàn)[1]，以苯-乙酸乙酯(19∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干， 10%硫酸乙醇液噴霧顯色，熱風(fēng)吹干(80 ℃)，日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同的暗紅色斑點(diǎn)，見(jiàn)圖1。

2.2 黃芪的鑒別

取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品內(nèi)容物粉末2 g，置索氏提取器中，加甲醇50 mL冷浸1 h，水浴回流2 h;提取液回收甲醇并濃縮至干，殘楂加水10 mL微熱使溶解;用水飽和的正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，用氨試液處理2次，棄除氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?～5 mL使溶解，放冷;通過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱，先以水50 mL洗脫，棄除水液，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄除40%乙醇液，繼用70%乙醇50 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2 mL量瓶?jī)?nèi)，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取黃芪藥材粉末1.5 g，依上述供試品溶液的制備方法制備對(duì)照藥材溶液。按處方量，取除黃芪外的其余藥味，按工藝要求制成缺黃芪的樣品，按供試品溶液的制備方法，制備陰性供試品溶液。吸取上述溶液各5 ?L，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗(yàn)[1]，以氯仿-甲醇-水(13∶6∶2)(10 ℃以下放置過(guò)夜)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾開(kāi)。噴霧10%硫酸乙醇液顯色，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同的暗藍(lán)色斑點(diǎn)，見(jiàn)圖2。

2.3 苦參的鑒別

取苦參堿對(duì)照品適量，加氯仿制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品內(nèi)容物粉末1 g，置具塞錐形瓶中，加氯仿-氨水(25∶0.3)20 mL，超聲提取20 min，濾過(guò)，水浴蒸干，加氯仿適量溶解，濾過(guò)，定容至10 mL，作為供試品溶液。取苦參藥材粉末0.5 g，加氯仿25 mL，濃氨試液0.3 mL，放置過(guò)夜，濾過(guò)，濾夜蒸干，殘?jiān)勇确?.5 mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。按處方量，取除苦參外的其余藥味，按工藝要求制成缺苦參的樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性供試品溶液。取上述4種溶液各5 ?L，分別點(diǎn)于同一以2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗(yàn)[1]，以苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾開(kāi)，噴以碘化鉍鉀試液，熱風(fēng)吹干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材、對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同的鮮紅色斑點(diǎn)，而陰性供試品色譜在此位置上無(wú)斑點(diǎn)，見(jiàn)圖3。

注：1，2.對(duì)照品;3，4.對(duì)照藥材;5，6.供試品;7，8.陰性供試品

圖3 苦參薄層鑒別圖譜

3 討論

苦參是本制劑的主要成分之一，筆者參考文獻(xiàn)[2]對(duì)苦參進(jìn)行定性鑒別，同時(shí)對(duì)方中丹參、黃芪進(jìn)行了定性鑒別。試驗(yàn)結(jié)果顯示，制劑中丹參、黃芪、苦參藥材的薄層定性鑒別斑點(diǎn)清晰明顯，結(jié)果重復(fù)性好，可作為寧心膠囊制訂定性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)。本品君、臣藥指標(biāo)性成分的含量測(cè)定方法與標(biāo)準(zhǔn)有待進(jìn)一步研究制定。

參考文獻(xiàn)

凝膠色譜范文第4篇

【關(guān)鍵詞】節(jié)能環(huán)保；綠色混凝土；攪拌站

一、前言

預(yù)拌混凝土企業(yè)起源于對(duì)散裝水泥的運(yùn)用，本身是一種節(jié)能減排的措施，但隨著人們對(duì)環(huán)境重視程度的不斷提高，“綠色生產(chǎn)”、“可持續(xù)發(fā)展”、“低碳”和“節(jié)能減排”等與環(huán)境協(xié)調(diào)發(fā)展等相關(guān)理念不斷在混凝土行業(yè)中出現(xiàn)，預(yù)拌混凝土生產(chǎn)過(guò)程中的環(huán)境污染問(wèn)題越來(lái)越受到重視，從目前行業(yè)發(fā)展水平來(lái)看，存在的突出問(wèn)題在于：

（1）預(yù)拌混凝土企業(yè)環(huán)保不達(dá)標(biāo)，生產(chǎn)過(guò)程中的噪音、粉塵和廢水超標(biāo)，對(duì)周邊環(huán)境和居民正常生活造成影響。（2）預(yù)拌混凝土企業(yè)綠化面積不達(dá)標(biāo)，廠區(qū)污水橫流、粉塵飛揚(yáng)，生產(chǎn)和運(yùn)輸設(shè)備臟、亂、差，與周邊環(huán)境形成反差，破壞了城市整體形象。（3）許多企業(yè)在生產(chǎn)過(guò)程中過(guò)度消耗不可再生資源，不能對(duì)工業(yè)廢渣、再生骨料、尾礦等廢棄資源進(jìn)行綜合利用。（4）預(yù)拌混凝土企業(yè)生產(chǎn)銷售過(guò)程中出現(xiàn)的廢棄混凝土未能得到及時(shí)有效利用，成為新的建筑垃圾，在增加資源消耗的同時(shí)加大了環(huán)境負(fù)擔(dān)。在這種發(fā)展現(xiàn)狀下，建設(shè)現(xiàn)代化綠色環(huán)保攪拌站已經(jīng)成為加快建設(shè)資源節(jié)約型、環(huán)境友好型社會(huì)的必然要求。

南京普迪混凝土有限公司是1996年成立的南京市混凝土行業(yè)龍頭企業(yè)，目前有4個(gè)攪拌站，由于地處市區(qū)，均面臨著市政規(guī)劃的拆遷。作為南京市混凝土協(xié)會(huì)的會(huì)長(zhǎng)級(jí)單位，公司在拆遷建站方面積極配合地方政府，并響應(yīng)國(guó)家和社會(huì)的綠色環(huán)保要求，嚴(yán)格按照最新綠色混凝土生產(chǎn)企業(yè)規(guī)范，去年在南京江北永寧成功新建了一座綠色環(huán)保、全封閉的花園式工廠，完全解決了上述行業(yè)內(nèi)普遍存在的問(wèn)題。

本文以南京普迪混凝土有限公司永寧站建設(shè)實(shí)例，從建站背景和總體思路、選址和市場(chǎng)及投資分析、平面規(guī)劃和功能區(qū)分布、設(shè)備選型和三廢處理、管理創(chuàng)新和經(jīng)營(yíng)效果分析等方面成功經(jīng)驗(yàn)分析，以期為我國(guó)綠色混凝土攪拌站的建設(shè)和管理提高借鑒。

二、建站背景和總體思路

南京普迪混凝土有限公司自成立至今，已經(jīng)成功運(yùn)營(yíng)了17年，曾經(jīng)成功地抓住了南京市河西地區(qū)大開(kāi)發(fā)的機(jī)遇，從當(dāng)初的一個(gè)攪拌站，發(fā)展成為在南京江南、江北擁有4個(gè)攪拌站，6條生產(chǎn)線的大型混凝土企業(yè)，年生產(chǎn)銷售量一直處于南京市前三甲。隨著南京城市中心區(qū)的擴(kuò)大和市政大型建設(shè)的要求，原處城市中心區(qū)的幾個(gè)攪拌站都面臨拆遷，同時(shí)，現(xiàn)代綠色攪拌站規(guī)范的出臺(tái)，對(duì)早期攪拌站節(jié)能環(huán)保的要求和壓力越來(lái)越大。公司在面臨外部拆遷壓力的同時(shí)，更考慮到企業(yè)的長(zhǎng)遠(yuǎn)發(fā)展必然要符合國(guó)家節(jié)能環(huán)保的綠色要求，決定從戰(zhàn)略的高度首先考慮在江北籌建高標(biāo)準(zhǔn)的綠色混凝土攪拌站。

通過(guò)市場(chǎng)和行業(yè)的充分調(diào)研，以及對(duì)國(guó)家相關(guān)政策的理解和把握，公司認(rèn)為建設(shè)綠色節(jié)能環(huán)保站，既符合了國(guó)家對(duì)綠色建筑材料的要求，也能夠從企業(yè)內(nèi)部管理運(yùn)營(yíng)上實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)效益。因此，公司的總體思路是：建設(shè)節(jié)能環(huán)保的綠色花園式工廠，以資源利用最大化、環(huán)境污染最小化、廠區(qū)建設(shè)最優(yōu)化為基本目標(biāo)，采用節(jié)能設(shè)備、先進(jìn)技術(shù)與管理措施，將綠色理念貫穿攪拌站建設(shè)、運(yùn)營(yíng)的各個(gè)環(huán)節(jié)，實(shí)現(xiàn)混凝土生產(chǎn)全過(guò)程的綠色生產(chǎn)。

三、選址和市場(chǎng)及投資分析

（一）選址

根據(jù)公司建站的總體思路，公司成立新站籌備組，全權(quán)負(fù)責(zé)新站的籌備建設(shè)工作，首先，在江北選址。根據(jù)攪拌站拌和設(shè)備的自身特點(diǎn)，對(duì)場(chǎng)地的要求應(yīng)從經(jīng)濟(jì)、便利、安全和環(huán)保等方面綜合統(tǒng)籌考慮。

（1）場(chǎng)地應(yīng)選擇交通便捷，原材料供應(yīng)經(jīng)濟(jì)方便。（2）場(chǎng)地選擇應(yīng)考慮混凝土的運(yùn)輸半徑輻射范圍和市場(chǎng)。（3）環(huán)保因素，場(chǎng)地應(yīng)遠(yuǎn)離住宅和人口稠密區(qū)。（4）場(chǎng)地的土地符合國(guó)家建設(shè)要求，并能實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)遠(yuǎn)經(jīng)營(yíng)的需要。

基于以上四點(diǎn)，籌備組與江北永寧鎮(zhèn)達(dá)成一致，先期租用永寧57畝地，一年后拿到土地指標(biāo)，土地轉(zhuǎn)讓給普迪公司，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)久經(jīng)營(yíng)。從土地的位置、面積和道路狀況，非常適合做攪拌站。事實(shí)上，在選址過(guò)程中，公司已經(jīng)貫徹了節(jié)能環(huán)保理念，我們?cè)?jīng)考察過(guò)的兩塊地就是因?yàn)槲恢煤铜h(huán)境問(wèn)題不符合節(jié)能環(huán)保理念而放棄。

（二）市場(chǎng)和投資分析

江北浦口是南京的新市區(qū)，與南京主城隔江相望，面積914平方公里，是長(zhǎng)江進(jìn)入江蘇段的第一門戶，也是南京“以江為軸，跨江發(fā)展”的中心區(qū)域。隨著省市政府沿江大開(kāi)發(fā)和“跨江發(fā)展”戰(zhàn)略的實(shí)施，高速鐵路、城市輕軌、過(guò)江隧道等交通設(shè)施的貫通，整個(gè)浦口的建設(shè)和發(fā)展將迎來(lái)新契機(jī)。未來(lái)8～10年，浦口區(qū)將投入700億元用于江北新城的基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)，規(guī)劃建設(shè)面積約70平方公里，全面提升城市品質(zhì)、完善城市功能。根據(jù)發(fā)展規(guī)劃，江北新城將著力培育“五大產(chǎn)業(yè)”、打造“十大功能區(qū)”，逐步拉開(kāi)城市框架和產(chǎn)業(yè)載體框架。至2017年，現(xiàn)代化江北新城將基本建成，成為呼應(yīng)江南主城，輻射蘇北皖豫的新城區(qū)。江北新城區(qū)的基礎(chǔ)建設(shè)，商業(yè)地產(chǎn)、房地產(chǎn)的開(kāi)發(fā)，產(chǎn)業(yè)園區(qū)、沿江碼頭的興建，將為江北混凝土企業(yè)未來(lái)帶來(lái)較多的發(fā)展機(jī)會(huì)。目前，江北地區(qū)每年混凝土需求量穩(wěn)定在600萬(wàn)立方以上。隨著江北開(kāi)發(fā)步伐的加快，預(yù)測(cè)未來(lái)江北地區(qū)商品混凝土的需求量呈穩(wěn)步上升趨勢(shì)。

我們的選址永寧鎮(zhèn)完全輻射上述市場(chǎng)，通過(guò)對(duì)市場(chǎng)、行業(yè)產(chǎn)能和投資經(jīng)濟(jì)效益的分析，公司決定在永寧興建年產(chǎn)80萬(wàn)方（兩個(gè)3方機(jī)、一個(gè)2方機(jī)）的大型綠色混凝土攪拌站。

四、平面規(guī)劃和功能區(qū)分布（環(huán)保概念和理念）

（一）攪拌站的功能區(qū)描述

攪拌站主要分為：原材料進(jìn)場(chǎng)、過(guò)磅、原材料取樣與檢測(cè)、試驗(yàn)配比、卸料與堆料、上料、皮帶運(yùn)輸、拌料、裝罐車、取任務(wù)單、過(guò)磅、出廠等環(huán)節(jié)，同時(shí)還要考慮罐車清洗、維修、停車、待料、辦公、員工休息等。因此，各功能區(qū)要綜合考慮，在平面規(guī)劃設(shè)計(jì)上要科學(xué)規(guī)劃，是各自有相對(duì)獨(dú)立性，有相互關(guān)聯(lián)，既保證生產(chǎn)有序，同時(shí)考慮能耗、噪音等環(huán)保因素。

（二）各功能區(qū)劃分與布置

使各功能區(qū)布置緊湊，又不相互影響，同時(shí)在考慮各自功能的時(shí)有意識(shí)貫徹節(jié)能環(huán)保的設(shè)計(jì)原則。

（1）進(jìn)廠道路和地磅區(qū)：原材料的進(jìn)出和部分罐車進(jìn)出廠都應(yīng)過(guò)磅，則地磅應(yīng)設(shè)置在廠區(qū)主出入口。（2）攪拌生產(chǎn)區(qū)、砂石材料庫(kù)存區(qū)：采用封閉砂石料倉(cāng)和料倉(cāng)內(nèi)噴淋，確保粉塵最小化；采用地倉(cāng)式骨料上料，減少裝載機(jī)上料能耗；車輛實(shí)現(xiàn)廠內(nèi)內(nèi)循環(huán)，減少粉塵和能耗；采用電子大屏和刷卡等待系統(tǒng)，減少待料車輛能耗損失等等。（3）辦公和員工休息區(qū)：加大該區(qū)域綠化，通過(guò)綠化隔離帶與廠區(qū)相對(duì)隔離，優(yōu)化辦公和休息環(huán)境。（4）污水砂石分離處理區(qū)：全廠設(shè)計(jì)回路水溝，實(shí)現(xiàn)污水循環(huán)使用；設(shè)計(jì)污水和砂石分離設(shè)備，實(shí)現(xiàn)污水和砂石的二次利用，實(shí)現(xiàn)全廠污水零排放。（5）車輛維修區(qū)：設(shè)計(jì)安排在全封閉料倉(cāng)背面，減少噪音污染，提高場(chǎng)地利用空間。

五、設(shè)備選型和三廢處理

國(guó)內(nèi)生產(chǎn)圍繞混凝土生產(chǎn)相關(guān)設(shè)備的廠家舉不勝舉，在大力推行環(huán)保型攪拌站建設(shè)的今天，各類設(shè)備生產(chǎn)廠家無(wú)一不稱之為符合環(huán)保型攪拌站對(duì)設(shè)備的要求，事實(shí)不盡如此。環(huán)保型攪拌站的主要特征是：從外觀上看，攪拌站的料場(chǎng)，斜皮帶，主樓及筒倉(cāng)全封裝，內(nèi)部結(jié)構(gòu)則加強(qiáng)除塵，防震，減噪效果，配備砂石分離機(jī)與漿水回收系統(tǒng)，攪拌站生產(chǎn)物料“零排放”，從而實(shí)現(xiàn)混凝土的高效，環(huán)保生產(chǎn)。這就要求我們?cè)谠O(shè)備造型上要高度重視對(duì)設(shè)備的整體要求和細(xì)節(jié)考慮。但需要提出的是，并不是全封裝的攪拌站就是環(huán)保型攪拌站，也不是設(shè)備具備環(huán)保功能就是環(huán)保站。真正的環(huán)保站必須是全封裝和設(shè)備本身優(yōu)良的環(huán)保性能的結(jié)合體，同時(shí)還要做到造型美觀。基于這樣的理念和對(duì)設(shè)備的要求，我們?cè)谠O(shè)備招投標(biāo)時(shí)，都一一做了具體的要求。例如：設(shè)備低碳節(jié)能，生產(chǎn)效率高；廢水廢渣循環(huán)利用；易損件使用壽命長(zhǎng)；設(shè)備無(wú)跑冒，滴漏等現(xiàn)象；攪拌主機(jī)安裝支座上配備防震墊，減少主樓的震動(dòng)；混凝土質(zhì)量穩(wěn)定，合格率高，整體全封閉外觀與內(nèi)部環(huán)保性能內(nèi)外兼修。在一些主要的細(xì)節(jié)上，我們考慮到設(shè)備上能滿足做到的重要的環(huán)保要求。

1.順應(yīng)節(jié)能減排的要求，對(duì)各部分大功率電機(jī)采用變頻調(diào)速控制，主要是大規(guī)格螺旋輸送機(jī)，電機(jī)和斜皮帶機(jī)電機(jī)，既可提高計(jì)量精度，又做到了節(jié)能降耗。

2.主樓，筒倉(cāng)，斜皮帶及砂石料場(chǎng)全方位完整封閉，實(shí)現(xiàn)粉塵，噪音的完全隔離。砂石料場(chǎng)添加噴淋裝置再減粉塵。

3.粉倉(cāng)采用組合式高效防塵方式，脈沖強(qiáng)制式反吹收塵，并實(shí)現(xiàn)二次收塵。裝有可測(cè)試料位計(jì)，杜絕暴倉(cāng)，杜絕揚(yáng)塵。

4.主樓部分的除塵，由被動(dòng)除塵轉(zhuǎn)向主動(dòng)除塵，由單一除塵轉(zhuǎn)向綜合除塵。從根本上消除主樓處揚(yáng)塵。

5.采用地倉(cāng)式配料機(jī)。稱量斗位于地面以下，有效地隔阻了砂石下落時(shí)的噪聲，配料機(jī)及砂石堆場(chǎng)位于封閉大棚內(nèi)，大大降低了裝載機(jī)作業(yè)時(shí)噪聲對(duì)外界的影響。

6.雨水排放與漿水處理完全獨(dú)立。雨水自然排放。砂石分離后歸倉(cāng)再用。漿水入八角池?cái)嚢韬笾匦螺斎霐嚢铏C(jī)臺(tái)用于低標(biāo)號(hào)混凝土。廢水過(guò)濾壓縮成塊再利用，多種辦法解決廢水利用問(wèn)題，既可防止外加劑泄露造成的污染，又能保證混凝土的質(zhì)量。

7.外加劑稱設(shè)防漏裝置，既可防止外加劑泄露造成的污染，又能保證混凝土的質(zhì)量。

8.辦公區(qū)統(tǒng)一進(jìn)行景觀設(shè)計(jì)，種植枝葉繁茂的樹(shù)木，以達(dá)到吸聲隔音的效果。

9.建筑材料盡可能使用綠色建材，使用天然資源的能源，無(wú)毒，無(wú)污染，無(wú)放射性材料。

10.利用廠房大面積屋頂?shù)膬?yōu)勢(shì)，做中水循環(huán)利用，對(duì)雨水收集后做日常洗車，節(jié)約水資源。

11.輔助用房的宿舍部分和職工食堂淋浴用熱水采用太

陽(yáng)能加熱輔助以電加熱的模式，節(jié)約能源。

六、管理創(chuàng)新和經(jīng)營(yíng)效果分析

環(huán)保型攪拌站與老攪拌站已經(jīng)發(fā)生了翻天覆地的根本性的變化。但使用攪拌站的人還是那撥人，眾多職工的理念有沒(méi)有更新，尤其是國(guó)有企業(yè)的職工，惰性嚴(yán)重，接受新事物的欲望較弱。這一現(xiàn)實(shí)的難題擺在公司的面前。如何在廣大的職工隊(duì)伍中全面推行環(huán)保的意識(shí)和理念，這是在使用環(huán)保型攪拌站之前所必須解決的問(wèn)題。

1.培訓(xùn)：什么是環(huán)保型攪拌站？為什么要建環(huán)保型攪拌站？環(huán)保型攪拌站會(huì)給我們帶來(lái)什么益處？仁者見(jiàn)仁，智者見(jiàn)智。請(qǐng)專家授課，每一位職工必須全部完成專家的授課時(shí)間，并進(jìn)行理論考試。

2.觀摩：組織全體員工對(duì)公司新建的環(huán)保型攪拌站進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)觀摩。主要解決的問(wèn)題是讓員工隊(duì)伍了解新老攪拌站的客觀上的區(qū)別，和我們?cè)趯?shí)際操作過(guò)程中應(yīng)該知道的注意事項(xiàng)。并組織員工對(duì)環(huán)保型攪拌站進(jìn)行整體的操作演練，在演練過(guò)程中發(fā)現(xiàn)問(wèn)題糾正錯(cuò)誤。良好的習(xí)慣必須從頭抓起。

3.制度：把老攪拌站運(yùn)作過(guò)程中的各項(xiàng)管理制度拿出來(lái)重新梳理，有悖于環(huán)保型攪拌站運(yùn)行的規(guī)章制度加以改變。使之成為符合環(huán)保型攪拌運(yùn)作的規(guī)章制度應(yīng)運(yùn)而生。中國(guó)有句老話，沒(méi)有規(guī)矩不成方圓。靠制度約束人的行為必將行之久矣。

南京普迪混凝土有限公司，在理念更新，與時(shí)俱進(jìn)的宗旨下，成功的給永寧環(huán)保站進(jìn)行了具有時(shí)代氣息的定位。在設(shè)備選型的硬件配套商，完美地與環(huán)保型攪拌站進(jìn)行了一次姻緣組合。在管理創(chuàng)新上，破除桎梏，把人的因素放在首位，較好地實(shí)現(xiàn)了企業(yè)效益，社會(huì)效益，環(huán)境和諧的共贏局面。進(jìn)一步提升了普迪品牌的社會(huì)聲譽(yù)。環(huán)保型攪拌站的成功運(yùn)作，必將給普迪公司帶來(lái)長(zhǎng)遠(yuǎn)的，可持續(xù)性的發(fā)展。

七、結(jié)論

從目前使用狀況來(lái)看， 南京普迪混凝土有限公司永寧站已經(jīng)充分體現(xiàn)了節(jié)能效果，實(shí)現(xiàn)了混凝土生產(chǎn)無(wú)廢料、無(wú)噪音、無(wú)廢水，零排放，在管理上運(yùn)用GPS和局域網(wǎng)的等企業(yè)管理手段，大大地提高了運(yùn)營(yíng)效率，既實(shí)現(xiàn)了企業(yè)效益的大提升，更為加快建設(shè)資源節(jié)約型、環(huán)境友好型社會(huì)作出了貢獻(xiàn)。

參 考 文 獻(xiàn)

[1]陳向鋒.混凝土攪拌站管理實(shí)用手冊(cè).北京中國(guó)建材工業(yè)出版社，2011

凝膠色譜范文第5篇

【摘要】 目的從舟山眼鏡蛇蛇毒中分離L氨基酸氧化酶(LAO)，測(cè)定其理化和酶學(xué)性質(zhì)。方法應(yīng)用Sephadex G100凝膠色譜和POROS CM20離子交換色譜分離純化LAO;Wellner和Lichtenberg法測(cè)定LAO活力;SDSPAGE法測(cè)定相對(duì)分子質(zhì)量。結(jié)果舟山眼鏡蛇蛇毒經(jīng)Sephadex G100凝膠色譜和兩次POROS 20 離子交換色譜后，獲得LAO純品(暫定名NALAO)。NALAO在非還原和還原條件下相對(duì)分子質(zhì)量均為58 kD左右;其反應(yīng)最適pH為8.0，最適溫度為60 ℃，對(duì)L苯丙氨酸的米氏常數(shù)(Km)為3.08 mmoL/L。結(jié)論應(yīng)用凝膠過(guò)濾色譜和離子交換色譜可從舟山眼鏡蛇毒中分離純化LAO。

【關(guān)鍵詞】 眼鏡蛇毒液類; 氨基酸氧化還原酶

蛇毒成分復(fù)雜，主要為酶和毒素，L氨基酸氧化酶(EC.1.4.3.2)在蛇毒中分布非常廣泛，在蝰科、響尾蛇科、眼鏡蛇科以及蝮蛇科中都有分布[14]。L氨基酸氧化酶(Lamino acid oxidase，LAO)是蛇毒中一種重要的活性組分，能夠催化L氨基酸的氧化脫氨反應(yīng)，生成相應(yīng)的α酮酸、氨以及過(guò)氧化氫[5]，具有多種生物活性，如誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、抑制或誘導(dǎo)血小板聚集、細(xì)胞毒性和抗菌活性等[610]。已從幾種蛇毒中分離得到LAO，筆者應(yīng)用凝膠色譜和離子交換色譜從舟山眼鏡蛇蛇毒分離LAO，并對(duì)其部分理化和酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行初步研究。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1蛇毒舟山眼鏡蛇(Naja atra)蛇毒凍干粉，福建醫(yī)科大學(xué)蛇毒研究所提供。

1.1.2試劑與儀器L苯丙氨酸(批號(hào)040924，上海翔軍生物科技有限公司);砷酸鈉（Lot#:0892B82，美國(guó)Amresco公司）;過(guò)氧化氫酶（AA1041，美國(guó)Sigma公司）。SephadexG100凝膠柱(瑞典Amersham Pharmacia Biotech公司);CM20陽(yáng)離子交換填料預(yù)裝柱(POROS 20，美國(guó)Applied Biosystems公司);BioCAD純化工作站(美國(guó)Applied Biosystems公司);自動(dòng)部分收集器(BSZ100)和恒流泵(HL1，上海滬西分析儀器廠);恒溫?fù)u床(美國(guó)Forma公司);紫外分光光度計(jì)(美國(guó)Biorad公司);試劑均為進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2方法

1.2.1眼鏡蛇蛇毒的凝膠色譜Sephadex G100凝膠柱(2.6 cm×100 cm)用HAcNaAc緩沖液(pH 5.8，0.05 mol/L+NaCl 0.05 mol/L)預(yù)先平衡過(guò)夜。稱取眼鏡蛇粗毒0.5 g溶于10 mL雙蒸水，4 ℃靜置過(guò)夜，4 ℃ 10 000 r/min離心10 min。取上清液凝膠柱，用HAcNaAc緩沖液洗脫，流速16 mL/h。收集洗脫液，4 mL/管，根據(jù)D(280 nm)值繪出洗脫曲線。

1.2.2凝膠色譜組分LAO活力按文獻(xiàn)[5]介紹的流程和反應(yīng)體系進(jìn)行分離組分酶活力測(cè)定。凝膠色譜洗脫組分0.1 mL與L苯丙氨酸反應(yīng)，以終產(chǎn)物的光密度值[D(300 nm)]為指標(biāo)，以反應(yīng)體系中加HAcNaAc緩沖液0.1 mL取代蛇毒組分為未加酶對(duì)照。一個(gè)活力單位定義為在上述條件下得到0.03D300 nm所需的酶量。

1.2.3LAO純化合并經(jīng)凝膠色譜收集的具有LAO活性的組分。以POROS 20進(jìn)行純化。線性梯度洗脫(A液:0.05 mol/L，pH 5.8的HAcNaAc緩沖液;B液:含有0.5 mol/L NaCl的平衡液)，收集洗脫蛋白峰，濃縮和脫鹽。測(cè)定POROS 20離子交換層析各組分的LAO活性，收集具有活性的組分，用POROS 20離子交換層析，以0.02 mol/L，pH 6.2的HAcNaAc緩沖液平衡，線性梯度洗脫(A液:0.02 mol/L，pH 6.2的HAcNaAc緩沖液;B液:含有0.5 mol/L NaCl的平衡液)，進(jìn)一步純化，收集活力峰，濃縮、透析脫鹽。

1.2.4LAO純度鑒定及相對(duì)分子質(zhì)量按堿性不連續(xù)系統(tǒng)進(jìn)行。樣品按是否含有2%β巰基乙醇分為還原性和非還原性兩種。在Hoefer電泳儀上電泳2 h，穩(wěn)流12 mA/10 cm×10 cm。常規(guī)染色脫色。在Image Master VDS凝膠成像系統(tǒng)上依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白繪制標(biāo)定曲線，計(jì)算相對(duì)分子質(zhì)量。

1.2.5蛋白質(zhì)濃度采用文獻(xiàn)[11]方法，將待測(cè)蛋白質(zhì)溶液適當(dāng)稀釋，在波長(zhǎng)260 nm和280 nm處分別測(cè)出D值，然后利用280 nm和260 nm波長(zhǎng)下的吸收差求出蛋白質(zhì)的濃度。

蛋白質(zhì)濃度(mg/mL)=1.45D(280 nm)-0.74D(260 nm)

1.2.6LAO對(duì)溫度和pH適應(yīng)性最適pH測(cè)定:在pH 6.0~10.0緩沖液中，其他條件不變，測(cè)定酶活力。最適溫度測(cè)定:酶液在0.4 moL/L，pH 7.8的TrisHCl緩沖液中，測(cè)定20，30，40，50，60和70 ℃下的酶活力。以酶活力最高者為100%，其余折算為最高活力的百分?jǐn)?shù)，并以pH或溫度為橫坐標(biāo)，最高活力百分?jǐn)?shù)為縱坐標(biāo)，繪制酶活力適應(yīng)曲線。

1.2.7LAO米氏常數(shù)(Km)酶液與不同濃度L苯丙氨酸反應(yīng)，利用反應(yīng)終止法測(cè)定酶反應(yīng)初速度(V)，根據(jù)LineweaverBurk作圖法求出該酶對(duì)L苯丙氨酸的Km值[12]。

2結(jié)果

2.1眼鏡蛇蛇毒凝膠色譜眼鏡蛇毒粗毒經(jīng)Sephadex G100凝膠層析后獲得5個(gè)蛋白峰，分別標(biāo)記為Ⅰ~Ⅴ。其中第Ⅱ峰具有LAO活力。從粗毒500 mg中可獲得Ⅱ組分38.6 mg，蛋白回收率約7.8%(圖1，表1)。

樣品:眼鏡蛇蛇毒(500 mg);凝膠柱:Sephadex G100 2.6 cm×100 cm;洗脫液:HAcNaAc緩沖液(0.05 mol/L，pH 5.8，含0.05 mol/L NaCl);流速:16 mL/h，4管/h;陰影部分為L(zhǎng)氨基酸氧化酶活性組分.

圖1眼鏡蛇蛇毒的Sephadex G100凝膠色譜

Fig 1Gel filtration of Naja atra venom on Sephadex G100

2.2LAO純化凝膠色譜第Ⅱ峰經(jīng)CM20預(yù)裝柱POROS 20 進(jìn)行分離，分離后可得到7個(gè)洗脫峰，其中第4峰具有LAO活力(圖2)。合并收集該組分，再次用POROS 20 純化，得到A、B兩個(gè)蛋白峰，經(jīng)活性測(cè)定，其中第B峰具有LAO活性。該組分經(jīng)SDSPAGE鑒定為電泳純暫定名為NALAO。從粗毒到獲得NALAO各層析步驟的目的組分得率及酶活性變化(表1)，NALAO在眼鏡蛇毒粗毒中的含量約為0.3％。 表1L氨基酸氧化酶的酶活力變化及得率樣品:第Ⅱ組分;上樣體積:5 mL;色譜柱:CM20 (POROS 201.6 mm×100 mm);緩沖液體系:A液:HAcNaAc(pH 5.6，0.05 mol/L);B液:A液+0.5 moL/L NaCl;梯度:30%~100%，25CV;流速1 mL/min;出現(xiàn)“—”組分具有L氨基酸氧化酶活性.

轉(zhuǎn)貼于

圖2POROS 20 離子交換色譜圖

Fig 2Ionexchange chromatography of LAO on CM20 (POROS 20)

2.3NALAO純度鑒定及相對(duì)分子質(zhì)量NALAO經(jīng)12.5%SDSPAGE電泳為一條清晰的蛋白帶(圖3)，NALAO不論是還原還是非還原SDSPAGE電泳均為一條帶，說(shuō)明NALAO為單鏈蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量約58 kD。

2.4NALAO對(duì)溫度和pH的適應(yīng)性在LAO酶活力測(cè)定的體系中，改變反應(yīng)溫度，其余條件不變，NALAO在20~70 ℃區(qū)間，60 ℃時(shí)活力最高。以60 ℃時(shí)LAO活力為100%，繪制NALAO在不同溫度下的酶活力(圖4)。

在pH 6.0~10.0的緩沖體系，NALAO活性在pH 8.0時(shí)為最高，在pH 9.0~10活性較pH 8.0為低，但仍保持較高活性。以pH 8.0時(shí)酶活力為100%，繪制NALAO在不同pH下的酶活力(圖5)。

2.5LAO米氏常數(shù)(Km)以苯丙氨酸為底物，在pH 7.8，37 ℃下，根據(jù)LineweaverBurk雙倒數(shù)作圖法作圖，得出的方程為:[1/V]=0.0276+0.0851*[1/S]，計(jì)算眼鏡蛇LAO對(duì)L苯丙氨酸的Km值為3.08 mmoL/L(圖6)。

3討論

3.1眼鏡蛇毒LAO的分離純化蛇毒是多種酶或非酶蛋白質(zhì)或多肽的混合物，含有多種相對(duì)分子質(zhì)量大小不等、等電點(diǎn)各異的蛋白質(zhì)或多肽分子。分離蛇毒中活性成分有凝膠過(guò)濾層析法、離子交換層析法、疏水層析法和反相層析法等。筆者根據(jù)眼鏡蛇毒中各種組分相對(duì)分子質(zhì)量的差異應(yīng)用Sephadex G100凝膠過(guò)濾法進(jìn)行分離，具有LAO活性的組分為相對(duì)分子質(zhì)量相對(duì)較大的成分，約占粗毒7.8％，這一過(guò)程去除了大量相對(duì)分子質(zhì)量低的組分(約90%)，為進(jìn)一步用離子交換層析降低了層析柱負(fù)荷。由于凝膠色譜分級(jí)所得到的活性組分間還含有不少其他非LAO的蛋白質(zhì)，因此，根據(jù)蛋白質(zhì)的荷電性質(zhì)差異，應(yīng)用ROROS 20弱陽(yáng)離子交換色譜進(jìn)一步分離，發(fā)現(xiàn)70％為非LAO蛋白質(zhì)。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)和前期預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，筆者采用在不同pH條件下的ROROS 弱陽(yáng)離子交換色譜，將相對(duì)分子質(zhì)量和等電點(diǎn)接近的蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離，結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)第一次ROROS 色譜所得具有LAO活性的蛋白峰再次經(jīng)ROROS 色譜柱(洗脫液pH由5.6改為6.2，洗脫梯度由30%~100％改為0~50％)獲得兩個(gè)色譜峰，含有LAO的為第B峰。

3.2蛇毒LAO的理化性質(zhì)及活性根據(jù)以往的研究報(bào)道，從不同蛇毒中分離純化出來(lái)的LAO有不同的結(jié)構(gòu)，以同二聚體或異二聚體形式存在的相對(duì)分子質(zhì)量分布在100~142 kD，以單體蛋白質(zhì)形式存在的相對(duì)分子質(zhì)量55~60 kD[3]。本文分離得到的眼鏡蛇毒LAO即NALAO在還原與非還原條件下，SDSPAGE電泳均顯示一條帶，說(shuō)明它為單鏈蛋白質(zhì)，相對(duì)分子質(zhì)量為58 kD，與文獻(xiàn)報(bào)道的江浙蝮蛇毒LAO相似。Tan等報(bào)道的同屬眼鏡蛇科的孟加拉眼鏡蛇(Naja kaouthia)毒LAO及Ahn等報(bào)道的眼鏡王蛇毒LAO均為同二聚體蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量分別為112和135 kD[1，4]，說(shuō)明不同蛇毒的LAO的理化性質(zhì)差異很大，但是LAO單體或二聚體存在與蛇種關(guān)系不大。

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